一枝黄花的提取工艺研究.docxVIP

摘?要：目的：以芦丁作为考察的指标性成分，确定一枝黄花的最佳提取工艺参数。方法：采用正交试验法，对乙醇浓度、乙醇用量、提取次数、提取时间等参数进行考察。结果：最佳提取工艺参数为70%乙醇10倍量、每次提取1.5h、提取3次。结论：应用该工艺参数提取一枝黄花的芦丁得率高，为一枝黄花提取工艺的确定提供了实验依据。

关键词：一枝黄花；芦丁；乙醇回流提取；正交试验

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0?引言

一枝黄花是菊科一枝黄花属植物一枝黄花（SolidagodecurrensLour.）的干燥全草，主产于长江以南各地。一枝黄花的化学成分包括黄酮、皂苷、苯甲酸苄酯、当归酸桂皮酯、炔属化合物、苯丙酸等。在2015年版《中华人民共和国药典》一部中，一枝黄花是以芦丁作为其指标性成分进行定量考察的。本文采用正交试验法，结合单因素考察，以有效成分芦丁作为指标，对一枝黄花的提取工艺进行了优化研究，为一枝黄花生产工艺的确定提供了依据。

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1?实验材料

1.1?药材

一枝黄花药材购自贵州遵义，经江西普正制药有限公司质量管理部检测为一枝黄花。

1.2?仪器

高效液相色谱仪：Waters1525型高效液相色谱仪；色谱柱：HypersilC18柱（4.6mm×250mm）；JK-100型超声波清洗器；SHB-ⅢS型循环水式多用真空泵；RE-5203A型旋转蒸发仪；HHS-24型电热恒温水浴锅；SZ-93自动双重纯水蒸馏器。

1.3?试剂

乙腈、甲醇为色谱纯，超纯水，其余试剂为分析纯。

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2?提取方法

选择乙醇回流提取法和水煎煮法对一枝黄花药材进行提取，结合HPLC法测定芦丁含量，对其提取工艺进行初步研究。

2.1?乙醇回流提取法

2.1.1?60%乙醇回流提取

称取一枝黄花药材10g，用60%乙醇（V/V）回流提取2次，每次加入60%乙醇10倍量，第一次提取3h，第二次提取2h，滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供试品溶液。

2.1.2?70%乙醇回流提取

称取一枝黄花药材10g，用70%乙醇（V/V）回流提取2次，每次加入70%乙醇10倍量，第一次提取3h，第二次提取2h，滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供试品溶液。

2.1.3?80%乙醇回流提取

称取一枝黄花药材10g，用80%乙醇（V/V）回流提取2次，每次加入80%乙醇10倍量，第一次提取3h，第二次提取2h，滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供试品溶液。

2.2?水煎煮法

称取一枝黄花药材10g，用水煎煮2次，每次加水10倍量，第一次煎煮3h，第二次煎煮2h，滤过，合并滤液，浓缩后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供试品溶液。

2.3?合格标准

2.3.1?检测方法

按照《药典》四部通则0512规定的高效液相色谱法测定一枝黄花中的芦丁含量。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.4%醋酸溶液（16:8:76）为流动相；检测波长为360nm。理论板数按芦丁峰计算应不低于2500。

对照品溶液的制备：取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，称定重量，加热回流40min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.3.2?合格标准

本品按干燥品计算，含无水芦丁（C27H30O16）不得少于0.10%，即1mg/g。

2.4?结果

采用上述提取方法所得一枝黄花提取液中的芦丁含量如表1所示。

表1?提取液中芦丁含量

从表1可知：采用乙醇回流提取法和水煎煮法所提取的无水芦丁含量相差较多。水煎煮法的无水芦丁得率约为乙醇回流提取法的1/10～1/8。而采用60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇回流提取的无水芦丁含量差别不大。

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3?提取正交试验

通过上述对不同提取方法的考察，本文选择了乙醇回流提取法对一枝黄花进行提取，并继续通过采用正交试验法对乙醇回流提取法的工艺参数进行考察。

3.1?因素水平的确定

正交试验以芦丁得率为指标，对乙醇浓度（因素A）、乙醇用量（因素B）、提取时间（因素C）、提取次数（因素D）四个参数进行考察，因素水平表如表2所示。

表2?因素水平表

按照L9（34）正交设计表进行9组试验。由于没有空白因素列，因此每组试验重复进