利用单细胞藻类探究不同色光对光合作用的影响——以微囊藻与小球.docx

利用单细胞藻类探究不同色光对光合作用的影响——以微囊藻与小球藻为例

施欣彤姜锶濠章熙东谭啸

(1.南京外国语学校江苏南京210008)

(2.河海大学环境学院潜水湖泊综合治理与资源开发教育部重点实验室江苏南京210024)

光合作用是植物最基本的生命活动,是获得能量和释放氧气的重要途径,是地球上最重要的合成代谢之一,在苏教版高中生物学《必修1·分子与细胞》模块中占据重要地位,也是教学中的重难点。《普通高中生物学课程标准(2017年版)》明确,为了让学生更好地理解和掌握教学内容,教学中要高度重视学生的实践环节,力求为学生提供更多的动手实践机会。因此,为帮助学生达成对“细胞的生存需要能量和营养物质,并通过分裂进行增殖”大概念的理解,促进学生生物学学科核心素养的提升,教师应开展“探究不同环境因素对光合作用的影响”的教学活动。苏教版新教材必修1提供了利用天竺葵为实验材料,探究“不同光质的单色光对植物光合作用的影响”的开放式实验,为学生提供了很好的学科实践机会。但在教学中发现,以不同光质的光(用蓝色、红色、绿色玻璃纸遮光)为自变量,以光合产物淀粉含量为因变量开展实验,操作过程中对无关变量(如光照强度、温度)的控制较难,而且用碘液来鉴定淀粉,无法进行定量分析,使该实验的教学效果受到很大影响。因此,教师可利用单细胞藻类如铜绿微囊藻(常见蓝藻)、小球藻(常见绿藻)为实验材料,用LED灯管提供不同色光,以细胞浓度增加(细胞增殖)、藻类光合活性的变化(叶绿素荧光)为因变量,利用光照培养箱培养藻类以控制无关变量,利用叶绿素荧光技术对荧光参数进行定量分析,使实验的过程更具科学性,能很好地让学生进行定量研究的学科实践,有利于培养学生的创新精神和问题解决能力。

铜绿微囊藻是常见的水华蓝藻,是原核藻类,蛋白核小球藻为常见绿藻,是真核单细胞藻类,二者在细胞结构、色素组成及光利用率上差异明显,常常在湖泊中共存或竞争生长。自然水体中的有色可溶物、悬浮颗粒物及水分子等会选择性吸收不同波长的光,使得不同水域的水下光谱存在差异。同时,深度也是水下光谱的影响因子之一,如随着水深的增加,蓝绿波段的光快速衰减使得红光所占的比例迅速增大。因此,探究不同色光对微囊藻和小球藻生长和光合活性的影响,利于让学生了解“富营养化水体中大量繁殖的蓝藻抑制了包括绿藻在内其他藻类的生长,造成了严重的水生态安全问题”,利于引导学生从水下光谱变化的角度深度思考蓝藻优势确立的原因,进而培养水环境保护意识。

光合活性表征的是藻细胞光合系统在一定条件下的状态,受到科学家普遍关注。叶绿素荧光,作为光合作用研究的重要指标,包含了许多光合信息,几乎所有光合作用过程的变化均可通过叶绿素荧光反映出来。藻类细胞的光合活性通常可用叶绿素荧光表征,经过暗适应的藻细胞在低强度测量光条件下会发出初始荧光F0,经过饱和脉冲高光强后发出最大荧光Fm(Fm为最大荧光,进而计算最大可变荧光Fv=Fm-F0)。Fv/Fm表征的是暗适应下PSⅡ(光系统Ⅱ)反应中心完全开放时的最大光合速率,常作为表达藻类光合活性是否受损的敏感性指标。通常当藻类受到胁迫时,叶绿体中的光系统Ⅱ是首先而且也是主要损害的部位。荧光测定技术可以不伤害生物体进行活体分析,因此通过研究叶绿素荧光来间接研究光合作用的变化是一种简便、快捷、可靠的方法。

蛋白核小球藻与铜绿微囊藻(FACHB-469),均购自中国科学院水生生物研究所的淡水藻种库。

将微囊藻与小球藻在光照培养箱中用BG11培养基进行培养,温度设定为25±1℃,光暗周期比为12h∶12h。将藻种培养至对数期再进行无菌接种,初始接种浓度为5×104cells/mL。共设置红光组、蓝光组和白光组。红光或蓝光处理分别由LED单色灯获得,通过改变光源距离培养锥形瓶的位置,分别调节红光组、蓝光组和白光组的光强,使各组光强均为45μm·mol/(m2·s)。藻种活化9天后接种,进行正式实验,每个色光处理设置3个平行,每天定时摇动锥形瓶3次。

2.3.1藻细胞浓度测定

采用血球计数板每3天对微囊藻培养液中藻细胞浓度计数,具体步骤如下:取洁净的血球计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片。将藻悬液摇匀(在藻细胞生长后期,浓度较高的时期进行适当的稀释),用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入藻悬液。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数。计数区由25个中方格组成,数左上、左下、右上、右下及中央1个大方格的藻细胞数(即80个小格)。

每个样品重复计数3次(每次数值误差不超过10%,否则应重新操作),按公式计算出每mL藻液所含细胞数量。藻细胞浓度计算公式如下:

C=5N