槐米中芦丁及槲皮素提取分离及鉴定.docx

试验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分别及鉴定

槐米为豆科植物槐〔SophorajaponicaL．〕的未开放花蕾。味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。槐米常炒炭应用。

槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。芦丁具有Vitp样作用，可降低毛细血管脆性和调整通透性。临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的关心治疗药。

[目的要求]

通过芦丁的提取与精制把握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。

把握槲皮素的制备原理及操作。

生疏紫外光谱在黄酮构造鉴定中的应用

通过芦丁的构造检识，了解苷类构造争论的一般程序和方法。

[试验原理]

芦丁〔rutin〕：C H O ·3H

O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃

27 30 16 2

〔含三分子水〕；188℃〔无水物〕。难溶于冷水〔1：8000～10000〕，可溶于热水〔1：180～200〕，热甲醇〔1：10〕，冷甲醇〔1：100〕，热乙醇〔1：60〕，冷乙醇〔1：650〕；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。

槲皮素〔quercetin〕：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃

〔2分子结晶水〕，316℃〔无水物〕。能溶于冷乙醇〔1：290〕，易溶于沸乙醇〔1：23〕，可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。

+鼠李糖+葡萄糖

芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进展提取分别。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进展精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进展制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进展黄酮及糖的鉴定。

[试验内容]

一、芦丁的提取分别及精制方法⑴

槐米粗粉〔50g〕

置1000ml烧杯中，参加500ml饱和石灰水，加热，并维持pH8～9

煮沸20分钟，趁热用脱脂棉滤过

滤液 药渣

用300ml饱和石灰水煮沸10分钟，维持pH8～9

趁热滤过

滤液 药渣〔×〕

合并

在60℃～70℃下用浓HCl调pH至4 ～5静置，抽滤

沉淀

低温〔80℃〕枯燥，称重。按1：200的比例加水，加热使溶解，趁热滤过

滤液

静置，抽滤，减压枯燥，计算收率芦丁精制品

方法⑵利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进展提取分别。

槐米粗粉

沸水煮沸5～10分钟，反复2次

趁热滤过

水提取液 药渣

放冷

沉淀析出〔粗芦丁〕

热水重结晶或乙醇重结晶

芦丁结晶

二、槲皮素的制备

称取精品芦丁1g

置250ml烧瓶中加2%H2SO4200ml

加热回流1小时放冷，静置，抽滤

酸性滤液 沉淀

中和 水洗两次，枯燥乙醇重结晶

中性滤液 称重，计算收率浓缩

黄色细针状结晶

浓缩液 〔槲皮素〕

〔供糖的PC鉴定〕

三、检识反响

芦丁的定性反响

取芦丁适量，加乙醇使溶解，分成三份供下述试验用：

盐酸镁粉试验：取样品液适量，加2滴浓HCl、再酌加少许镁粉，即产生猛烈的反响，并渐渐消灭红色至深红色。

锆-枸试验：取样品液适量，然后加2％ZrOCl2的甲醇溶液，留意观看颜色变化，再参加2％枸椽酸的甲醇溶液，并具体记录颜色

变化。

α-萘酚-浓硫酸反响：取样品液适量，加等体积的l0％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁缓加浓硫酸，留意观看两液界面的颜色。

芦丁的UV

(1)鉴定试剂的配制

①甲醇钠溶液：取0.25g金属钠，切碎，留神参加色谱甲醇

10ml中，此液置于玻璃瓶中，用橡皮塞密封。

②三氯化铝溶液：取1g无水三氯化铝，留神参加色谱甲醇

20ml中，放置24小时后全部溶解即得。

③醋酸钠：用无水粉末醋酸钠。

④⑤硼酸饱和溶液：取无水硼酸，参加适量色谱甲醇、制成饱和溶液。

〔上述贮备液可放置六个月〕

芦丁溶液的配制

周密称取芦丁纯品0.5g，用甲醇适量溶解至50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。

光谱的测定

①甲醇光谱：取样品液置石英杯中，至200～500nm内进展扫描，重复一次，观看紫外光谱。

②甲醇钠光谱：取样品液置石英杯中，参加甲醇钠溶液3滴后，马上测定，放置5分钟后再测一次。

③三氯化铝光谱，在盛有样品液的石英杯中，参加三氯化铝6滴，放置1分钟后进展测定。测定后参加3滴盐酸溶液〔盐酸：水＝1：1〕再进展测定。

④醋酸钠光谱：取样品液约3ml，参加过量的无水醋酸钠固体，摇匀〔杯底剩有约2mg的醋酸钠〕，参加醋酸钠后两分钟内测定，5分钟到10分钟后再测定一