DB51_T1282-2011_猪副嗜血杆菌分离鉴定技术规范_四川省.docxVIP

ICS11.220

B41

DB51

备案号：30885-2011

地方标准

DB51/T1282—2011

猪副嗜血杆菌分离鉴定技术规范

四川省质量技术监督局发布

DB51/T1282—2011

目次

前言...............................................................................II

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3

术语和定义........................................................................1

4猪副嗜血杆菌的分离鉴定............................................................1

附录A（资料性附录）

培养基和试剂制备................................................4

I

DB51/T1282—2011

前言

本标准附录A为资料性附录。

本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。

本标准由四川省动物疫病预防控制中心负责起草。

本标准起草人：岳

华、余勇、张东、张焕容、汤承、杨发龙、于学辉、阳爱国、陈代平、

陈斌、罗毅、张代芬

II

DB51/T1282—2011

猪副嗜血杆菌分离鉴定技术规范

1范围

本标准规定了猪副嗜血杆菌（HaemophilusParasuis,HPs）的分离鉴定方法。

本标准适用于猪副嗜血杆菌的分离鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

猪副嗜血杆菌HaemophilusParasuis,HPs

猪副嗜血杆菌为嗜血杆菌属中的一种细菌，为酶系统发育不完全的革兰氏阴性杆菌，生长需要血

液中的生长因子，尤其是X因子和V因子。

是人工合成的两段寡核苷酸序列，用于聚合酶链式反应，其中一条引物与目标片段一端的一条DNA

模板链互补，另一条引物与目标片段另一端的另一条DNA模板链互补。

4.1.1二氧化碳培养箱

4.1.2微量移液器（0.1μL～10μL、2μL～20μL、20μL～200μL、200μL～1000μL）及相应型号

1

DB51/T1282—2011

4.1.3微型离心机（适合于对PCR反应管进行离心操作）

4.1.4无菌工作台

4.1.5接种环、接种针、酒精灯及酒精棉球

4.1.6PCR扩增仪及电泳仪

4.2培养基和试剂（见附录A）

4.2.1胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TryptoneSoyAgar,TSA）

4.2.2胰蛋白胨大豆肉汤（TrypcaseinSoyBroth,TSB）

4.2.3烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD），小牛血清

4.2.4革兰氏染色液

4.2.5TAE缓冲液

4.2.6琼脂糖及显色液

4.2.7相关生化试剂3％过氧化氢溶液、1%盐酸二甲基对苯二胺溶液、1%α-萘酚－乙醇溶液、木糖、

果糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、D核糖和山梨醇。

4.2.8PCR鉴定相关试剂TaqDNA聚合酶（5U/μL）、MgCl2（25mmol/L）、dNTP（每种浓度为2.5mmol/L）、

10×PCRBuffer(无Mg)。

2+

4.3.1分别从濒死猪或死亡不超过8小时的病（死）猪的关节腔、心包、胸腔、肺脏、心血、气管、

腹腔、脑等部位，无菌采集样本接种于含5%小牛血清和0.0002％NAD的TSA琼脂培养基平板。

4.3.2将平板置于5%CO237℃的培养箱中培养24h～48h。

4.3.3观察平板上有无疑似HPs的菌落。HPs在TSA平板上形成圆形、凸起、透明或半透明的无色小

菌落。挑取革兰氏染色符合HPs特性的单个可疑菌落划