脑膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白NhhA：克隆表达、免疫原性解析及疫苗潜力探究.docxVIP

脑膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白NhhA：克隆表达、免疫原性解析及疫苗潜力探究

一、引言

1.1研究背景

脑膜炎奈瑟氏菌（Neisseriameningitidis，Nm），又被称为脑膜炎双球菌，属于奈瑟氏菌属，是一种革兰氏阴性双球菌，也是引发流行性脑脊髓膜炎的主要病原体。流行性脑脊髓膜炎是一种急性传染病，具有较高的致死率和严重的后遗症，尤其是对2岁以下的婴幼儿危害极大。患者感染脑膜炎奈瑟氏菌后，可能会出现发热、头痛、颈部僵硬、恶心、呕吐、意识障碍等症状，严重者还可出现休克、呼吸衰竭、弥散性血管内凝血等并发症，甚至危及生命。

在世界范围内，脑膜炎奈瑟氏菌感染仍然是一个严重的公共卫生问题。从20世纪60年代起，Nm对磺胺的耐药现象日益普遍，使得以疫苗为主的预防措施显得尤为重要。目前，从患者及健康带菌者身上分离出的Nm可分为12个血清群，约90%的流脑由A、B、C群引起，在发达国家中，B群引发的流行性脑脊髓膜炎病例更是高达总病例的80%。

针对A、C、Y、W135群引起的脑脊髓膜炎，荚膜多糖菌苗已有30多年的预防历史，如今多糖蛋白结合疫苗及多价疫苗的应用更为有效。然而，B群脑膜炎奈瑟氏菌（serogroupBN.meningitidis，MenB）的荚膜多糖与人N-乙酰神经氨酸聚合物结构相似，不具备免疫原性，因此多糖菌苗的策略并不适用于MenB。对于B群脑膜炎奈瑟氏菌，其外膜蛋白和脂寡糖成为了研究的重点。

脑膜炎奈瑟氏菌的外膜蛋白NhhA（NeisseriaHia/Hsfhomologue），是大肠杆菌细菌表面配基AIDA-I以及流感嗜血杆菌Hia和Hsf的同系物，广泛存在于各种致病性血清亚群的Nm中。NhhA全长590个氨基酸，C端非常保守，被认为参与多聚化，N端则既有保守域也有可变区，与其蛋白功能相关。研究表明，NhhA在宿主-病原体相互作用中发挥着重要功能，例如参与Nm无症状鼻咽黏膜定植，诱导巨噬细胞凋亡，具有免疫刺激功能等。体外实验证明NhhA参与Nm对宿主细胞的黏附，NhhA缺失的Nm对Chang上皮细胞的黏附失败，而表达NhhA的大肠杆菌对宿主细胞的黏附表现出剂量依赖效应，并且纯化的NhhA能够黏附细胞外基质和肝素。此外，鼠类模型证实NhhA对于Nm定植于鼻咽粘膜继而引发脑脊髓膜炎起到关键作用，更重要的是它能保护Nm免受宿主天然免疫系统的攻击。

鉴于NhhA在致病性Nm中具有高度保守性，且反向疫苗学研究发现其暴露于外膜表面，有可能诱导产生杀菌抗体等因素，NhhA很可能是一种有效的针对Nm的疫苗候选蛋白。对其进行克隆表达及免疫原性分析，将为开发针对脑膜炎奈瑟氏菌的疫苗奠定基础，具有重要的理论和实际应用价值。

1.2NhhA研究现状

近年来，脑膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白NhhA在脑膜炎奈瑟氏菌的研究领域中备受关注，取得了一系列重要进展。在分子结构方面，研究发现NhhA全长590个氨基酸，其C端高度保守，主要参与多聚化过程，而N端既有保守区域也存在可变区，这与它在宿主-病原体相互作用中的多种功能密切相关。

在功能研究上，大量实验表明NhhA在脑膜炎奈瑟氏菌侵染宿主的过程中发挥着关键作用。体外细胞实验显示，NhhA参与了脑膜炎奈瑟氏菌对宿主细胞的黏附。当NhhA缺失时，脑膜炎奈瑟氏菌对Chang上皮细胞的黏附能力消失；而表达NhhA的大肠杆菌对宿主细胞的黏附呈现出剂量依赖效应，且纯化后的NhhA能够与细胞外基质和肝素相结合，这为脑膜炎奈瑟氏菌在宿主体内的定植提供了重要的前提条件。

在动物模型研究中，通过鼠类模型证实了NhhA对于脑膜炎奈瑟氏菌定植于鼻咽粘膜，进而引发脑脊髓膜炎起到了不可或缺的作用。更为重要的是，NhhA能够保护脑膜炎奈瑟氏菌免受宿主天然免疫系统的攻击，比如它可以抑制吞噬细胞对细菌的吞噬作用，同时减少补体介导的杀伤，增强细菌在血液中的存活能力，从而促进致命性败血症的发生。此外，NhhA还被发现具有免疫刺激功能，能够诱导巨噬细胞凋亡，这进一步影响了宿主的免疫反应进程。

由于NhhA在致病性脑膜炎奈瑟氏菌中具有高度保守性，并且反向疫苗学研究发现其暴露于外膜表面，这使得它有可能诱导机体产生杀菌抗体。目前，许多研究都将NhhA作为潜在的疫苗候选蛋白进行深入探索。一些研究尝试通过克隆表达NhhA，并对其免疫原性进行分析，结果显示NhhA能够诱导机体产生免疫反应，如产生特异性的IgG抗体，并且能诱导针对B群脑膜炎奈瑟氏菌的补体依赖的杀菌反应。然而，NhhA作为疫苗候选物仍面临一些挑战