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基于血清筛选探究东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因

一、引言

1.1研究背景与意义

血吸虫病是一种由血吸虫寄生引起的全球性分布的人畜共患寄生虫病，对人类健康和社会经济发展造成了严重威胁。世界卫生组织（WHO）数据显示，全球仍有74个国家和地区流行血吸虫病，受威胁人口超过2亿，每年约有20万人死于血吸虫病相关并发症。在我国，血吸虫病流行历史悠久，主要流行于长江流域及其以南的12个省（市、自治区），严重影响了当地居民的身体健康和生活质量，制约了经济发展。

血吸虫病根据病程和临床表现可分为急性、慢性和晚期血吸虫病以及异位血吸虫病。急性期血吸虫病通常出现在尾蚴侵入人体后30-60天左右，患者表现为发热、食欲减退、腹部不适、轻微腹痛、腹泻、肝脾肿大等症状。若不及时治疗，病情会发展为慢性血吸虫病，患者可出现慢性腹泻、黏液血便、肝脾肿大、贫血等症状。晚期血吸虫病则会导致肝硬化、腹水、巨脾、结肠肉芽肿等严重并发症，患者常因上消化道出血、肝衰竭、肝性脑病或严重感染等并发症而死亡。异位血吸虫病如肺型血吸虫病会出现咳嗽、胸痛等症状，脑型血吸虫病可引起头痛、癫痫等。

目前，血吸虫病的防治面临诸多挑战。虽然吡喹酮是治疗血吸虫病的首选药物，但长期使用可能导致寄生虫产生耐药性，且吡喹酮无法预防血吸虫感染。此外，中间宿主钉螺的控制难度较大，加之人群对血吸虫病的防控意识不足，使得血吸虫病的传播难以得到彻底遏制。因此，深入研究血吸虫病的发病机制，寻找新的防治策略迫在眉睫。

东方田鼠是迄今发现的唯一一种对血吸虫具有天然抗性的哺乳动物，这使其成为研究血吸虫病抗性机制的理想动物模型。血吸虫在东方田鼠体内不能完全发育成熟，肝脏中无或较少虫卵肉芽肿的形成，这种独特的抗性现象为揭示血吸虫与宿主之间的相互作用机制提供了宝贵线索。通过对东方田鼠抗血吸虫机制的研究，有望筛选出抗血吸虫抗性相关靶基因，这些靶基因不仅有助于深入理解血吸虫病的发病机制，还能为抗血吸虫疫苗和治疗药物的研发提供新的靶点和思路。

在疫苗研发方面，目前尚无有效的血吸虫疫苗上市。传统疫苗研发策略在血吸虫疫苗研究中面临诸多困难，而基于东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因开发的新型疫苗，可能打破这一僵局，为血吸虫病的预防提供有力工具。在药物研发领域，以筛选出的靶基因为基础，设计和开发特异性的小分子抑制剂或生物制剂，有望提高药物的疗效和特异性，减少药物的副作用。

综上所述，开展东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因（血清筛选）的研究，对于揭示血吸虫病的抗性机制、推动抗血吸虫疫苗和治疗药物的研发、有效防控血吸虫病具有重要的理论和实践意义，有望为全球血吸虫病的防治工作带来新的突破。

1.2研究目的与创新点

本研究旨在利用东方田鼠血清，通过亲和淘洗等技术筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库，获取东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因，并对这些基因进行测序、生物信息学分析及功能验证，为深入揭示东方田鼠抗血吸虫的分子机制，以及抗血吸虫疫苗和治疗药物的研发提供关键靶点和理论基础。

目前，关于东方田鼠抗血吸虫机制的研究虽然取得了一定进展，但仍存在诸多不足。一方面，现有研究多集中在免疫细胞和免疫因子层面，对基因水平的研究相对较少，尤其是通过血清筛选抗血吸虫抗性相关靶基因的研究尚不够深入和系统。另一方面，已发现的相关基因功能验证不够充分，许多基因在抗血吸虫过程中的具体作用机制尚不明确，这在很大程度上限制了基于基因靶点的抗血吸虫疫苗和药物的研发进程。

针对上述不足，本研究具有以下创新点：一是采用多技术联用策略，综合运用噬菌体展示技术、亲和淘洗技术、高通量测序技术和生物信息学分析等，从基因层面全面深入地筛选和分析东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因，提高了研究的准确性和全面性。二是对筛选出的靶基因进行深入的功能验证，通过体内外实验探究基因在抗血吸虫过程中的具体作用机制，为抗血吸虫疫苗和治疗药物的研发提供更直接、更可靠的理论依据。三是本研究以东方田鼠血清为工具筛选靶基因，为揭示血吸虫与宿主之间的免疫识别和相互作用机制提供了新的视角，有望拓展对血吸虫病抗性机制的认识。

1.3研究思路与方法

本研究将从东方田鼠血清出发，运用多种先进技术，深入筛选和分析抗血吸虫抗性相关靶基因，具体研究思路与方法如下：

东方田鼠血清的采集与处理：选取健康成年的东方田鼠，采用心脏采血法采集血液样本，将血液在室温下静置1-2小时，待血液凝固后，以3000转/分钟的速度离心15分钟，分离出血清。将血清分装后，保存于-80℃冰箱备用。使用前，将血清在37℃水浴中解冻，并进行无菌过滤处理，以去除可能存在的微生物污染。

日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库的构建与筛选：提取日本血吸虫成虫的总RNA，利用反转录酶将其反转录为cDN