化学分析法课件.pptVIP

化學分析法②香菇多糖含量的測定精密稱取0.1000g試樣置碘量瓶中，加水20mL，加熱使溶解，加稀硫酸25mL，加熱回流4h，放冷，加酚酞指示劑1-2滴，加氫氧化鈉試液至中性，精密加入碘液（0.1mol/L）25.00mL，搖勻，逐滴加入氫氧化鈉試液4mL，邊加邊劇烈振搖，加塞密封，暗處放置10min，加稀硫酸4mL，立即用0.1000mol/L硫代硫酸鈉滴定液滴定，近終點時，加澱粉指示劑2mL，繼續滴定至藍色消失，記下硫代硫酸鈉滴定液消耗的體積V4。同樣操作做空白實驗，記下硫代硫酸鈉滴定液消耗的體積V3。化學分析法計算：水解後總單糖的含量=式中：c1——（I2）溶液的濃度，mol/L；c2——硫代硫酸鈉標準溶液的濃度V4——香菇多糖測定時消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積，mL；V3——空白試驗消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積，mL；0.5——樣品的品質,g;0.09——1mL標準碘液相當葡萄糖的量，g。香菇多糖的含量=後總單糖的含量-游離單糖的含量化學分析法四、糖化型澱粉酶活力的測定1．原理糖化型澱粉酶（即澱粉-1,4-葡萄糖苷酶）有催化澱粉水解的作用，從澱粉分子的還原性末端開始，分解α-1,4糖苷鍵生成葡萄糖。生成的葡萄糖用碘量法測定。其原理同雙糖中麥芽糖化力測定原理，使生成的葡萄糖在鹼性碘溶液中，被次碘酸鈉氧化：剩餘未作用的NaIO發生歧化反應，然後加入酸，使析出過量的碘，析出的碘用硫代硫酸鈉標準溶液滴定之。化學分析法2．試劑（1）1mol/L醋酸-醋酸鈉緩衝溶液。（2）0.05000mol/L硫代硫酸鈉標準溶液。（3）0.1mol/L（I2）溶液稱取12.7g碘，40g碘化鉀，置入燒杯中，加少量水小心用玻璃研磨至完全溶解，用水稀釋至1000mL，貯存於棕色瓶中。（4）0.1mol/LNaOH溶液4g氫氧化鈉用水溶解並稀釋至1000mL。（5）1mol/L硫酸吸取濃硫酸5.6mL，慢慢加入約80mL水中，冷卻後定容成100mL。（6）20%氫氧化鈉溶液。（7）2%可溶性澱粉溶液。化學分析法3．測定步驟（1）待測酶液的製備於50mL幹潔小燒杯中準確稱取酶粉2.000g，用少量0.1mol/L醋酸-醋酸鈉緩衝液溶解並用玻璃搗研，將上層清液移入適當的容量瓶中，沉渣再加少量緩衝液搗研，如此反復3～4次，最後全部移入容量瓶中,用緩衝液定容至刻度，搖勻，用4層紗布過濾供測定。若為液體的濃縮酶液，可直接吸取一定體積於容量瓶中，用緩衝液定容至刻度。（2）糖化操作於甲、乙兩支50mL比色管中，各加入2%可溶性澱粉溶液25mL，0.1mol/L醋酸-醋酸鈉緩衝液5mL，搖勻，於40℃水浴中預熱5～10min。化學分析法在甲管中加入酶液2mL（酶活力總量約為110～170單位）立即記時，搖勻，在此溫度下準確反應1h。反應畢，立即在甲、乙兩管中各加20%氫氧化鈉溶液0.2mL，搖勻，並將兩管用水迅速冷卻後，在乙管中，補加酶液2mL，作為對照。（3）滴定從甲、乙兩支管中分別吸取5.00mL反應液放入兩個碘量瓶中，準確加入碘液10mL，0.1mol/LNaOH溶液15mL，搖勻，於暗處反應15min。各加入1mol/L硫酸2mL，用0.05000mol/LNa2S2O3標準溶液滴定至剛好無色為終點，記下正式滴定和空白滴定所消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積。化學分析法（4）計算本法規定1g酶粉或1mL酶液在40℃，pＨ4.6的條件下，1h分解可溶性澱粉產生1mg葡萄糖的量為一個酶活力單位。酶活力==式中：V0——空白滴定消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積，mL；V——正式滴定消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積，mL；c——硫代硫酸鈉標準溶液的濃度，mol/L；90.05——（C6O6H12）葡萄糖的摩爾品質，g/mol；32.2/5——檢液的稀釋倍數V/2——酶液的稀釋倍數，其中V為酶液定容的體積，mL；W——酶粉的重量，g。化學分析法（5）注意①酶液製備時，酶液濃度最好控制在空白和檢液消耗的0.05000mol/L硫代硫酸鈉標準溶液的差數在3～6mL左右，即製備液每毫升約50～90個酶活力單位。②部頒標準規定統一使用浙江菱湖澱粉廠生產的化學純可溶性澱粉，若用其他可溶性澱粉時應先做對照試驗。化學分析法第五節含氮量的測定一、凱氏定氮法測定粗蛋白質的含量1．原理