固相析出分离法课件.pptVIP

金屬離子沉澱：與生物分子的酸性功能團作用的金屬複合鹽法；有機酸類複合鹽沉澱:與生物分子的鹼性功能團作用的有機酸複合鹽法（如苦味酸鹽、苦酮酸鹽、丹寧酸鹽等）。*二、成鹽沉澱法1．金屬離子沉澱：Mn2+、Fe2+、Co2+、Ni2+、Zn2+、Ca2+、Ba2+、Mg2+等；2．生成有機酸類複合鹽沉澱（1）丹寧即鞣酸（2）雷凡諾（3）三氯乙酸（TCA）*

雷凡諾*豬心提取液洗脫液上清液上清細胞色素C沉澱（去除）*吸附人造沸石鹽析45%飽和硫酸銨沉澱TCA透析三、親和沉澱利用親和反應原理，將配基與可溶性的載體偶聯後形成載體-配基複合物（親和沉澱劑），該複合物可選擇性地與蛋白質結合，在一定條件下沉澱出來。中性可溶，酸性沉澱。**四、高分子聚合物沉澱水溶性非離子型高分子聚合物，如不同分子量的聚乙二醇（PEG）、葡聚糖、右旋糖苷硫酸酯等，能使蛋白質水合作用減弱而發生沉澱。五、表面活性劑十六烷基三甲基季胺溴化物（CTAB）十六烷基氯化吡啶（CPC）*}酸性多糖*六、選擇性變性沉澱法熱變性沉澱法酸堿變性沉澱法利用試劑（氯仿）*固相析出分離法第一節鹽析法第二節有機溶劑沉澱第三節其他沉澱方法一、等電點沉澱法二、成鹽沉澱法*第四節結晶(crystallization)定義：溶液中的溶質在一定條件下因分子有規則的排列而結合成晶體。通過結晶，溶液中的大部分雜質會留在母液中，經過濾、洗滌可得到純度高的晶體。*一、結晶過程指溶質自動從過飽和溶液中析出形成新相的過程。C2—小晶體的溶解度；C1—普通晶體的溶解度；ρ—晶體密度；M—晶體品質；σ—晶體與溶液間的介面張力；γ2—小晶體的半徑；γ1—普通晶體的半徑；*固相析出分離法通過改變溶液條件，使溶質以固體形式從溶液中分出的操作技術。鹽析法有機溶劑沉澱法等電點沉澱法結晶法*第一節鹽析法(saltprecipitation)定義：鹽析法是利用各種生物分子在濃鹽溶液中溶解度的差異，通過向溶液中引入一定數量的中性鹽，使目的物或雜蛋白以沉澱析出，達到純化目的的方法。優點：簡單、經濟、較少變性缺點：解析度不高，要除鹽*兩種現象：鹽溶：低鹽情況，鹽離子強度的增高，蛋白質溶解度增大鹽析：高鹽，鹽離子強度增加，蛋白質溶解度減小*一、基本原理*原理形成離子對，部分中和了蛋白質的電性，排斥作用減弱而能相互靠近，聚集起來。中性鹽的親水性比蛋白質大，使蛋白質脫去了水化膜，使其沉澱。*在鹽析區，符合公式logS=?-Ks?S——蛋白質溶解度，g/L；?—鹽離子強度,Ci——i離子濃度，mol/L；Zi——i離子化合價；?——常數,為縱坐標上的截距;Ks——鹽析常數。*?、KS?為縱坐標上的截距，是外推截距，與無機鹽種類無關。KS是鹽析常數，與蛋白質和鹽的種類有關，但與溫度和pH無關。兩種類型：（1）在一定的pH和溫度下改變離子強度（鹽濃度）進行鹽析，稱作Ks鹽析法。（2）在一定離子強度下僅改變pH和溫度進行鹽析，稱作β鹽析法。*（一）、無機鹽的種類鹽析能力：半徑小的高價離子在鹽析時的作用較強，陰離子的鹽析效果比陽離子好，尤其以高價陰離子更為明顯。PO43-＞SO42―＞CH3COO―＞Cl―＞NO3―＞I―NH4+＞K+＞Na+＞Li+鹽析用鹽要考慮幾個因素：常用硫酸銨*二、影響鹽析的因素(二）溶質（蛋白質等）種類的影響*鹽析分佈曲線*（三）蛋白質濃度的影響蛋白質濃度提高，鹽用量減少。*（四）溫度的影響溫度的變化會影響?值。在無鹽或稀鹽溶液中，大多數蛋白質溶解度是隨溫度升高而增大的，但在高鹽溶液中常相反。*（五）pH的影響當溶液的pH在蛋白質等電點附近時，?值最小。利用?值最低點時pH的不同，可以分級沉澱蛋白質.*三、鹽析操作（一）鹽析用鹽的濃度表示固體粉末硫酸銨飽和溶液常用“飽和度”來表徵硫酸銨在溶液中的最終濃度，25℃時(NH4)2SO4的飽和濃度為4.1mol／L，定義它為100%飽和度.