基因工程制药课件.pptVIP

第八節基因工程藥物的分離純化許多醫藥生物技術產品都是活性肽或蛋白質。這些產品的制得具有下列特點：（1）目的產物在初始物料中含量較低（2）含目的產物得初始物料組成複雜，且影響較大（3）目的產物得穩定性差（4）種類繁多（5）應用面廣，對其品質、純度要求高，甚至要求無菌、無熱原等。因此，為了獲得合格得目的產物，必須建立與上述特點相適應的醫藥生物技術產品的分離純化工藝。一、建立分離純化工藝的依據1、含目的產物的起始物料的特點：包括（1）菌種類型及其代謝特性（2）原材料和培養基的來源及其品質（3）生產工藝和條件（4）初始物料的物理、化學和生物學特性。2、物料中雜質的種類和性質3、目的產物特性4、產品品質的要求二、分離純化的基本過程分離純化是基因工程藥物生產中極其重要的一環。一般不應超過4～5個步驟，包括細胞破碎、固液分離、濃縮與初步純化、高度純化直至得到純品以及成品加工。流程如圖3—7所示。重組蛋白表達及分離純化技術平臺基因工程藥物分離純化生產裝置三、分離純化的技術分離純化技術應滿足下列要求：（1）技術條件要溫和（2）選擇性要好（3）收率要高（4）兩個技術之間要能直接銜接（5）整個分離純化過程要快1、細胞破碎與固液分離：有細胞收集、細胞破碎和細胞碎片分離等步驟。（1）細胞收集：細胞收集常用的是離心分離的方法，膜過濾法液逐步得到廣泛應用。（2）細胞破碎：有機械破碎法和非機械破碎法。機械破碎法：高壓勻漿法、超聲破碎法、高速珠磨法、高壓擠壓法非機械破碎法：酶溶法、化學滲透法、熱處理法、滲透壓衝擊法等。基因工程制藥

第一節概述意義：自20世界70年代基因工程誕生以來，最先應用基因工程技術且目前最為活躍的研究領域便是醫藥科學。基因工程技術的迅猛發展使人們已能夠十分方便有效地生產許多以往難以大量獲得的生物活性物質，甚至可以創造出自然界中不存在的全新物質。1982年第一個基因重組產品——人胰島素在美國問世，吸引和激勵了大批科學家利用基因工程技術研製新藥品，迄今累計已有近30種基因工程藥物投入市場，產生了巨大的社會效益和經濟效益。基因工程技術可生產的藥物和製劑包括：（1）免疫性蛋白，如各種抗原和單克隆抗體；（2）細胞因數，如各種干擾素、白細胞介素、集落刺激生長因數、表皮生長因數、凝血因數；（3）激素，如胰島素、生長激素、心素納；（4）酶類，如尿激酶、鏈激酶、葡激酶、組織型纖維蛋白溶酶原啟動劑、超氧化物歧化酶。基因工程技術生產藥物的優點：（1）利用基因工程技術可大量生產過去難以獲得的生理活性蛋白質和多肽，為臨床使用提供有效保障；（2）可以提供足夠數量的生理活性物質，以便對其生理、生化和結構進行深入的研究，從而擴大這些物質的引用範圍；（3）利用基因工程技術可以發現，挖掘更多的內源性生理活性物質；（4）內源生理活性物質在作為藥物使用存放的不足之處，可以通過基因工程和蛋白質工程進行改造和去;（5）利用基因工程技術可獲得新型化合物，擴大藥物篩選來源。我國基因工程藥物研究和開發：起步較晚，基礎較差。α1b型基因工程干擾素是由我國自行研製開發的具有國際先進水準的生物高科技成果，於1997年通過Ⅲ期臨床，並獲得國家一類新藥證書，成為“863”計畫生物技術領域第一個實現產業化的基因工程藥物。目前我國已批准12種基因工程藥物和疫苗上市，在研究開發中的也有10餘種。第二節基因工程藥物生產的基本過程定義：基因工程技術是指將重組對象的目的基因插入載體，拼接後轉入新的宿主細胞，構建成工程菌（或細胞），實現遺傳物質的重新組合，並使目的基因再工程菌內進行複製和表達。基因工程藥物製造的一般流程：（1）獲得目的基因；（2）組建重組質粒；（3）構建基因工程菌；（4）培養工程菌；（5）產物分離純化；（6）除菌過濾；（7）半成品檢定；（8）包裝。1、上游階段：首先獲得目的基因，然後用限制性內切酶和連接酶將其插入適當的載體質粒或噬菌體中並轉大腸桿菌或其他宿主菌（細胞），以便大量複製目的基因。選擇基因表達系統主要考慮的是保證表達功能，其次要考慮的是表達量的多少和分離純化的難易。其中的（1）、（2）、（3）步驟屬於上游階段，在實驗室完成。2、下游階段：將實驗室成果產業化、商品化，它主要包括工程菌大規模發酵最佳參數大的確立，新型生物反應器的研製，高效分離介質及裝置的開發，分離純化的優化控制，高純度純品的製備技術，生物感