基因工程菌的发酵课件.pptVIP

基因工程菌的穩定性基因工程菌的遺傳不穩定性及其對策基因工程菌遺傳不穩定性的表現與機制改善基因工程菌不穩定性的策略基因工程菌的穩定性基因工程菌的遺傳不穩定性的表現基因工程菌的遺傳不穩定性主要表現在重組質粒的不穩定性，這種不穩定性具有下列兩種表現形式：結構不穩定性重組DNA分子上某一區域發生缺失、重排、修飾，導致其表觀生物學功能的喪失分配不穩定性整個重組DNA分子從受體細胞中逃逸（curing）基因工程菌的穩定性基因工程菌的遺傳不穩定性的的產生機制受體細胞中的限制修飾系統對外源重組DNA分子的降解外源基因的高效表達嚴重干擾受體細胞正常的生長代謝能量、物質的匱乏和外源基因表達產物的毒性誘導受體細胞產生應激反應：關閉合成途徑，啟動降解程式重組質粒在受體細胞分裂時的不均勻分配這是重組質粒逃逸的基本原因受體細胞中內源性的轉座元件促進重組分子的缺失重排基因工程菌的穩定性基因工程菌的遺傳不穩定性的的產生機制受體細胞中的限制修飾系統對外源重組DNA分子的降解外源基因的高效表達嚴重干擾受體細胞正常的生長代謝能量、物質的匱乏和外源基因表達產物的毒性誘導受體細胞產生應激反應：關閉合成途徑，啟動降解程式重組質粒在受體細胞分裂時的不均勻分配這是重組質粒逃逸的基本原因受體細胞中內源性的轉座元件促進重組分子的缺失重排基因工程菌的穩定性重組質粒的逃逸率當含有重組質粒的工程菌在非選擇性條件下生長時，培養系統中一部分細胞不再攜帶重組質粒，這些空載細胞數與總細胞數之比稱為重組質粒的宏觀逃逸率。重組質粒逃逸的原因有：高溫培養、表面活性劑（SDS）、藥物（利福平）、染料促使重組質粒滲漏受體細胞中的核酸酶降解重組質粒重組質粒在受體細胞分裂時不均勻分配，細胞所含重組質粒拷貝數的差異隨著細胞分裂次數的增多而加劇影響基因工程菌穩定性的因素載體的選擇遺傳特性宿主的選擇外源基因整合到宿主染色體上培養基生長速率發酵工藝限制性基質溫度pH和溶氧外源基因表達基因工程菌的穩定性提高基因工程菌穩定性的策略改進載體受體系統以增加質粒穩定性為目的的構建方法包括：將R1質粒上的parB基因引入表達型載體中其表達產物可以選擇性地殺死由於分配不均勻所產生的無質粒細胞正確設置載體上的多克隆位點禁止DNA片段插在穩定區內將受體細胞的致死性基因安裝在載體上同時構建條件致死性的相應受體系統，如大腸桿菌的ssb基因（DNA單鏈結合蛋白編碼基因）基因工程菌的穩定性培養基一些基因重組菌在複合培養基中顯示較高的質粒穩定性微生物在含有有機氮源如酵母抽提物、蛋白腖等營養豐富的複合培養基中培養時，由於培養基提供了生長必須的氨基酸和其他物質，微生物的生長較在基本培養基中快。培養條件對基因工程菌穩定性的影響比生長速