基因工程制药课件.pptVIP

Mullis的第一個PCR實驗1983年9月中旬。Mullis在反應體系中加入DNA聚合酶後在37℃一直保溫。結果第二天在瓊脂糖電泳上沒有看到任何條帶。於是他認識到有必要用加熱來解鏈，每次解鏈後再加入DNA聚合酶進行反應，依次迴圈。1983年12月，他終於看到了被同位素標記的PCR條帶。PCR的發展史1983年春，Mullis發展出PCR的概念；1983年9月，Mullis用大腸桿菌DNA聚合酶做了第一個PCR實驗，只用一個迴圈；1983年12月，用同位素標記法看到了10個迴圈後的49bp長度的第一個PCR片斷；1985年12月20日，Mullis的同事Saiki在Science上發了一篇論文，方法中用了PCR技術，導致Mullis的文章到處被拒；1985年10月25日申請了PCR的專利，1987年7月28日批准（專利號4,683,202），這回Mullis是第一發明人。1986年5月，Mullis在冷泉港實驗室做專題報告，全世界從此開始學習PCR的方法；1986年6月，Cetus公司純化了第一種高溫菌DNA聚合酶，TaqDNApolymerase，這是85年春天Mullis建議做的；1988年，第一臺PCR儀問世；1991年，HoffmanLaRoche以3億美元的代價從Cetus公司獲得全權開發權。PCR不只是一個方法改進Mullis的上司有句“名言”，“我們要擴增這麼多DNA樣品有什麼用”；到了1991，Cetus公司以3億美元的轉讓費將PCR相關專利轉讓給瑞士HoffmanLaRoche公司，並在此後的經營中又獲得了數億美元的分紅；Mullis於1993年獲得諾貝爾化學獎，PCR和DNA重組技術一樣意義深遠。*/chemistry/laureates/1993/mullis-lecture.html/chemistry/laureates/1993/mullis-autobio.htmlMullis,K.B.(1990)Theunusualoriginofthepolymerasechainreaction.ScientificAmerican.262(4)56-65.*PCR傳奇－－一個生物技術的故事。保羅·拉比諾著，朱玉賢譯。上海科技教育出版社，1998。基因工程制藥第一節基礎知識1.細胞的結構（真核和原核）真核細胞原核細胞細胞大小非細胞生命體2.細胞核中的染色體染色體

chromosomeDNA長度:4.6x107bp=1.5cmChromosome長度:2μm壓縮率=8000130nm纖維30nm染色質纖維5壓縮率=50H1H1H1H1H1H1消化時間MononucleosomeChromatosomeCoreParticleLinkerDNA(variable)染色體的解剖Chromatin4DNA組蛋白組蛋白3.DNAhelical10layerLinesBetweenCrossPatterns(10ResiduesPerturn)堿基互補：A/TC/GABZ手性Handedness螺距PitchBaseInclination12DNA半保留複製4.基因組任何一條染色體上都帶有許多基因，一條高等生物的染色體上可能帶有成千上萬個基因，一個細胞中的全部基因序列及其間隔序列統稱為genomes（基因組）。幾種生物的基因組比較病毒SV405.21環狀大腸桿菌40001環狀酵母17×1700017線狀人23×5-7×10623線狀種類大小（Kb）染色體數形狀5.基因DNA上具有特定功能的一個片斷，負責一種特定性狀的表達。一般來講，一個基因只編碼一個蛋白質。DNA上的基因6.DNA、RNA與蛋白質DNA:兩條互補鏈。由ATCG四個字母（堿基）形成的字串。RNA:單鏈結構。由AUCG四個字母（堿基）形成的字串。蛋白質:一條或多條肽鏈。每個肽鏈是由20種氨基酸形成的長鏈，即20個字母（氨基酸）形成的字串。翻譯：每3個堿基翻譯成一個氨基酸。中心法則DNARNA蛋白質DNA轉錄翻譯反轉錄複製