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苦参碱靶向调控AcrAB-TolC逆转细菌耐药性的机制研究

一、引言

1.1研究背景与意义

细菌耐药是全球公共卫生领域面临的严峻挑战。近年来，随着抗生素的广泛使用甚至滥用，细菌耐药问题日益严重。据统计，2019年全球有100多万人直接死于抗生素耐药性（AMR）感染，另有365万人因患有某种形式的AMR疾病死亡，预计到2050年，抗生素耐药性每年可能导致191万人死亡，另有822万人将死于与耐药性相关的疾病。耐药菌的出现，使得许多原本有效的抗菌药物失去治疗作用，常见传染病如败血症、肺炎等的治疗难度大幅增加。这不仅延长了患者的治疗周期，增加了患者的痛苦和医疗负担，还造成了医疗资源的极大浪费。对一些病情较重的患者而言，细菌感染耐药甚至会直接导致治疗效果不佳甚至无效，严重时危及生命。从社会层面来看，耐药菌的传播还对公共卫生安全构成了严重威胁。

为了应对细菌耐药问题，寻找有效的逆转耐药方法成为当务之急。目前，针对细菌耐药机制的研究不断深入，其中细菌外排泵系统在耐药过程中发挥着关键作用，成为研究的热点之一。大肠杆菌的三分体多药物外排泵系统AcrAB-TolC是疏水性和两性亲和性抗性诱导和细胞分裂（HAE-RND）转运蛋白家族的典型成员，在革兰氏阴性菌的多药耐药中起着关键作用，在其他革兰氏阴性ESKAPE细菌中也存在同源蛋白。AcrAB-TolC能够将多种抗生素及其他有害物质排出细胞外，降低细胞内抗生素浓度，从而使细菌获得耐药性。

苦参碱是豆科植物苦参的主要有效成分，具有广泛的药理活性，如抗炎、免疫调节、抗肿瘤、抗病毒等。近年来，苦参碱在逆转细菌耐药方面的作用逐渐受到关注。已有研究表明，苦参碱可能通过对细菌外排泵系统的调控，影响细菌对药物的外排，从而逆转细菌的耐药性。深入研究苦参碱对AcrAB-TolC的调控作用，揭示其在细菌耐药中的作用机制，不仅有助于丰富对细菌耐药机制和天然药物作用机制的认识，还可能为开发新型的抗菌药物或耐药逆转剂提供理论依据和实验基础，具有重要的理论意义和潜在的临床应用价值。

1.2国内外研究现状

在细菌耐药机制的研究中，AcrAB-TolC系统一直是国内外学者关注的焦点。众多研究表明，AcrAB-TolC在细菌耐药中发挥着关键作用。AcrAB-TolC系统由内膜转运蛋白AcrB、外膜通道蛋白TolC以及膜融合蛋白AcrA组成。当细菌接触抗生素等有害物质时，AcrB通过质子驱动力将底物从细胞周质转运至AcrA，AcrA再将底物传递给TolC，最终由TolC将底物排出细胞外。这种外排机制使得细菌能够降低细胞内抗生素的浓度，从而逃避抗生素的杀伤作用，导致耐药性的产生。研究发现，在大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌等多种革兰氏阴性菌中，AcrAB-TolC的高表达与细菌对β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类等多种抗生素的耐药密切相关。敲除AcrAB-TolC相关基因后，细菌对这些抗生素的敏感性显著提高。

针对AcrAB-TolC系统，国内外研究人员致力于开发外排泵抑制剂（EPIs）来逆转细菌耐药。目前已发现多种具有潜在应用价值的EPIs，如天然产物类的黄酮类化合物、生物碱类化合物，以及合成化合物类的苯丙氨酸-精氨酸β-萘基酰胺（PAβN）、1-（1-萘基甲基）-4-苯基吡啶（NMPP）等。这些EPIs能够通过不同的作用机制抑制AcrAB-TolC的功能，如与AcrB的底物结合位点竞争、干扰AcrA与AcrB或TolC的相互作用等。然而，目前大多数EPIs仍处于研究阶段，存在着诸如活性低、毒性大、稳定性差等问题，尚未有理想的EPIs应用于临床。

在苦参碱抗耐药的研究方面，近年来也取得了一定的进展。国内研究发现，苦参碱对多种耐药菌具有耐药逆转作用。有研究表明，苦参碱能够增强耐药大肠杆菌对环丙沙星、氨苄西林等抗生素的敏感性。在耐药金黄色葡萄球菌中，苦参碱也能提高其对抗生素的敏感性，降低最低抑菌浓度（MIC）。相关机制研究提示，苦参碱可能通过影响细菌细胞膜的通透性、抑制外排泵的表达或活性等途径来逆转耐药。然而，苦参碱对AcrAB-TolC系统的调控作用及其具体分子机制尚未完全明确。虽然已有一些初步研究表明苦参碱可能与AcrAB-TolC系统存在关联，但具体的作用位点、作用方式以及对该系统上下游信号通路的影响等方面仍有待深入探究。

国外对于苦参碱抗耐药的研究相对较少，但在天然产物抗耐药领域的研究为苦参碱的研究提供了一定的参考。国外研究发现一些天然产物能够通过调节细菌的群体感应系统、生物膜形成等机制来影响细菌的耐药性，这为苦参碱抗耐药机制的研究拓展了思路，提示苦参碱