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基于氧化石墨烯-适配体传感检测食品中四环素残留的研究

摘要

本研究构建了基于氧化石墨烯-适配体的传感体系用于检测食品中的四环素残留。利用氧化石墨烯对单链核酸的吸附及适配体与四环素的特异性结合，实现对四环素的高灵敏检测。通过优化实验条件，该方法在一定浓度范围内展现出良好线性关系，具有较高的灵敏度与选择性。将其应用于实际食品样品检测，取得了较为满意的结果，为食品中四环素残留的快速、高效检测提供了新的技术手段。

关键词

氧化石墨烯；适配体；四环素；食品检测

一、引言

1.1四环素的应用与危害

四环素类抗生素由于其广谱抗菌性，在畜禽养殖、水产养殖等领域被广泛用于预防和治疗动物疾病，同时也用于促进动物生长。然而，不合理且大量地使用四环素类抗生素导致其在食品中残留问题日益严重。食品中残留的四环素不仅会对人体肠道微生物菌群的平衡造成破坏，长期摄入还可能引发过敏反应、耐药性转移等健康问题，对人类健康构成潜在威胁。例如，在一些地区，因长期食用含有四环素残留的肉类产品，部分人群出现肠道菌群失调，引发腹泻等症状。而且，随着四环素耐药菌的不断出现，其对公共卫生安全的影响愈发凸显。因此，准确、快速检测食品中四环素残留量对于保障食品安全与公众健康具有重要意义。

1.2现有检测方法的局限性

目前，检测食品中四环素残留的方法众多，如高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS）、酶联免疫吸附测定法（ELISA）等。HPLC和LC-MS/MS虽然具有较高的准确性和灵敏度，能够精确测定四环素的含量，但存在设备昂贵、检测过程复杂、需要专业技术人员操作以及检测时间长等缺点，难以满足现场快速检测和大量样品筛查的需求。ELISA法虽然具有操作相对简便、检测速度较快的优点，但其抗体的制备过程复杂、成本高，且抗体稳定性较差，容易受到环境因素影响，导致检测结果的重复性和可靠性存在一定问题。此外，微生物检测法检测周期长，误差较大；荧光光度法的选择性不够理想。因此，开发一种简单、快速、灵敏且成本低廉的四环素残留检测方法迫在眉睫。

1.3氧化石墨烯-适配体传感检测技术的优势

氧化石墨烯（GO）是一种由碳原子组成的二维纳米材料，具有独特的物理化学性质。其表面含有丰富的含氧官能团，如羟基、羧基等，使其具有良好的亲水性和生物相容性。同时，GO具有较大的比表面积，能够通过π-π堆积作用、氢键作用等与单链核酸、蛋白质等生物分子发生强烈的相互作用。适配体是通过指数富集的配体系统进化技术（SELEX）从随机寡核苷酸文库中筛选得到的单链DNA或RNA序列，能够特异性地识别各种靶标分子，包括小分子、蛋白质、细胞等，且具有亲和力高、特异性强、稳定性好、易于合成和修饰等优点。基于氧化石墨烯-适配体的传感检测技术，巧妙地结合了两者的优势。利用GO对单链适配体的吸附作用，使得适配体在GO表面富集，当体系中存在四环素时，适配体与四环素特异性结合，形成适配体-四环素复合物，导致适配体从GO表面脱离，引起体系物理化学性质的变化，如荧光强度、电化学信号等改变，从而实现对四环素的检测。这种检测技术具有灵敏度高、选择性好、操作简便、成本低等优势，为食品中四环素残留检测提供了新的思路和方法。

二、实验部分

2.1实验材料与仪器

四环素标准品购自Sigma-Aldrich公司；氧化石墨烯（纯度≥99%）由本实验室采用改进的Hummers法制备；四环素适配体序列（5-GGTGGGTGGTGTGGGTGGTGTGGGTGGT-3）委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成；Tris-HCl缓冲液、NaCl、KCl等试剂均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。实验用水为超纯水（电阻率≥18.2MΩ?cm）。

荧光分光光度计（F-7000，日立公司）；电化学工作站（CHI660E，上海辰华仪器有限公司）；高速离心机（5424R，Eppendorf公司）；恒温振荡器（THZ-82，常州普天仪器制造有限公司）。

2.2氧化石墨烯的制备与表征

采用改进的Hummers法制备氧化石墨烯。将适量的天然鳞片石墨与硝酸钠混合，加入浓硫酸中，在低温下搅拌均匀。缓慢加入高锰酸钾，控制反应温度，反应一段时间后，逐渐升温继续反应。反应结束后，加入适量的去离子水稀释，再加入双氧水还原剩余的氧化剂，得到氧化石墨烯粗品。通过多次离心、洗涤，去除杂质，最后将氧化石墨烯分散在超纯水中，超声处理使其均匀分散，得到氧化石墨烯溶液。

采用透射电子显微镜（TEM）、原子力显微镜（AFM）、傅里叶变换红外光谱仪（FT-IR）对制备的氧化石墨烯进行表征。TEM图像显示，制备的氧化石墨烯呈薄片状，具有典型的二维结构；AFM图像表明，氧化石墨烯的