水质粪大肠菌群的测定.pptVIP

第1页，共29页，星期日，2025年，2月5日2水中微生物简介自然界的水可分为地下水和地面水，除了地下深层水外，如湖泊，河流，海洋等各种地面水中都存在着各种各样的微生物。但它们所含的微生物种类，数量和分布都不相同。其中有些是“土生土长”的。另一些水生细菌是外来的，它们来自土壤，空气，垃圾，工厂废物或城市下水道污水。而来自下水道的微生物中，很可能含有人体肠道致病菌，例如霍乱，伤寒，副伤寒和痢疾等病原菌。第2页，共29页，星期日，2025年，2月5日第3页，共29页，星期日，2025年，2月5日4污水的细菌学检验水质的细菌学检验主要包括两个常规项目：细菌总数和总大肠菌群。第4页，共29页，星期日，2025年，2月5日5总大肠菌群测定的两种方法多管发酵法滤膜法第5页，共29页，星期日，2025年，2月5日6粪大肠菌群的定义粪大肠菌群是总大肠菌群的一部分，主要来自粪便。在44.5℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。用提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。第6页，共29页，星期日，2025年，2月5日7适用范围本标准适用于地表水，地下水及废水中粪大肠菌群的测定。第7页，共29页，星期日，2025年，2月5日8原理多管发酵法是以最可能数（mostprobablenumber），简称MPN来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。第8页，共29页，星期日，2025年，2月5日9培养基及试剂本标准所用试剂除另有说明，均为符合国家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新制备的去离子水。第9页，共29页，星期日，2025年，2月5日10单倍乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉寖膏、5g乳糖和5g氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节溶液pH为7.2—7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管中，于115℃高压灭菌器中灭菌20min，贮存于冷暗处备用。第10页，共29页，星期日，2025年，2月5日11三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。除蒸馏水外，各组分用量增加至三倍。（即按上述配方比例三倍（除蒸馏水外），配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液）第11页，共29页，星期日，2025年，2月5日12EC培养液：成分：胰胨20克，乳糖5克，胆盐三号1.5克，磷酸氢二钾（K2HPO4）4克，磷酸二氢钾（KH2PO4）1.5克，氯化钠5克，蒸馏水1000毫升。制法：将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高压蒸气灭菌器中，115℃高压灭菌器中灭菌20min，灭菌后pH应为6.9。第12页，共29页，星期日，2025年，2月5日13培养基的存放在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低，温度低于30摄氏度的暗处，存放时应避免阳光直接照射，并且要避免杂菌倾入和液体蒸发。当培养液颜色变化，或体积变化明显时应废弃不用。第13页，共29页，星期日，2025年，2月5日14测定步骤1.水样接种量的选择将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。相对未受污染的水样接种量为10ml、1ml、0.1ml。受污染水样接种量根据污染程度接种1ml、0.1ml、0.01ml、或0.1ml、0.01ml、0.001ml等。第14页，共29页，星期日，2025年，2月5日15培养液的浓度和量的选择：如接种体积为10ml，则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5mL；如接种量为1mL或少于1mL，则可接种普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL中。第15页，共29页，星期日，2025年，2月5日162.初发酵试验将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在37℃±0.5℃下培养24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。入在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。第16页，共29页，星期日，2025年，2月5日17注意：加入水样时，先将培养管管口用