第三部分细胞工程.pptVIP

无菌室第19页，共64页，星期日，2025年，2月5日?设计要求墙壁光滑平整，地面平坦无缝，除出入口和通气口外，应当密闭，空气不能对流，或者空气经净化后进入室内。无菌室旁边应设有缓冲间，缓冲间内应有紫外灯，随时可进行灭菌。第20页，共64页，星期日，2025年，2月5日无菌室内的日常灭菌：定期用甲醛和高锰酸钾混合后熏蒸，产生大量蒸汽，杀灭微生物。使用前处理：用新洁尔灭（1：50）擦净，然后用紫外灯照射灭菌至少20分钟，操作前用70%酒精喷雾。第21页，共64页，星期日，2025年，2月5日?设备△紫外光灯△空调△放物架（或医用小平车：推送、放置培养基用；）△无菌操作用的器具：酒精灯、70%酒精消毒棉、解剖刀、弓背镊子、解剖针、剪刀等。第22页，共64页，星期日，2025年，2月5日△超净工作台：内设紫外灯、吹风装置、过滤装置等每次实验前要用紫外灯灭菌20分钟以上，然后喷酒精灭菌，工作过程中注意一直开着吹风机，并且一定要关掉紫外灯，过滤网应经常清洗。第23页，共64页，星期日，2025年，2月5日其它部件：△离心机：分离原生质体用；△点融合仪：细胞融合用。第24页，共64页，星期日，2025年，2月5日3培养室第25页，共64页，星期日，2025年，2月5日离体组织和试管苗生长发育的场所，应为培养物创造适宜的温、光、气等条件。?设计要求培养室内要求内壁保温、光滑、室顶高2.6m左右，易于控制温、湿度，窗上要求装双层密封玻璃窗，室内有足够电源。?作用第26页，共64页，星期日，2025年，2月5日?设备△空调机：冷暖型△加热器△定时装置：控制光照时间△培养架：放置培养瓶△摇床和转床：悬浮培养△各种光质灯管：光照培养△温度计：控制温度△遮光帘：供暗培养之用第27页，共64页，星期日，2025年，2月5日2、辅助实验室：?细胞学实验室?摄影室及暗室?生化分析室第28页，共64页，星期日，2025年，2月5日细胞学实验室?主要设备各种显微镜，显微照相设备，切片、制片仪器设备，染色用具，暗房设备等。?作用植物组织和细胞培养过程中，需随时观察记录其细胞学和形态解剖学的变化，故要设置细胞显微观察室。第29页，共64页，星期日，2025年，2月5日第30页，共64页，星期日，2025年，2月5日理化分析试验室第31页，共64页，星期日，2025年，2月5日二、基本操作技术第32页，共64页，星期日，2025年，2月5日基本操作技术主要是围绕无菌操作技术展开的一系列操作技能，内容主要包括：一．洗涤技术二．灭菌、消毒技术三、培养基配置技术四、接种技术第33页，共64页，星期日，2025年，2月5日（一）、洗涤技术?、洗涤目的：去除杂物，降低带菌量?、根据洗涤对象的不同，主要分为：器皿洗涤（包括玻璃、塑料、搪瓷、不锈钢器皿）培养材料洗涤第34页，共64页，星期日，2025年，2月5日一）器皿洗涤根据洗涤对象的具体情况可分为以下三种：特殊洗涤微生物大量污染的洗涤常规洗涤第35页，共64页，星期日，2025年，2月5日?常规洗涤△自来水洗去油渍、霉菌等脏物；△温肥皂水中浸泡一定时间后用刷子刷净；△自来水冲洗干净，至瓶壁不挂水珠为止；△蒸馏水淋洗内外壁△将玻璃器皿倒置：晾干或烘干（50～75℃）△放入除尘柜中备用第36页，共64页，星期日，2025年，2月5日?微生物大量污染的洗涤△微生物污染器皿加压灭菌后再洗涤特殊洗涤（如沾有蛋白质类物质或其它有机物时)△经过常规洗涤未过蒸馏水的器具，浸泡入洗液（铬酸洗涤液是用重铬酸钾(K2Cr2O7)与硫酸(H2SO4)配制而成）中数分至数小时；△回收洗液，器具先用自来水洗净，蒸馏水淋洗，烘干（75℃）第37页，共64页，星期日，2025年，2月5日二）、试验材料的清洗清洗目的：来自自然界的试验材料，包括来自土壤中的幼茎、磷茎，滋生着各种微生物，尤其是细菌的芽孢和真菌的孢子，一旦与培养基接触，就会很快的繁殖起来，造成培养基和培养材料的污染。清洗方法：先用自来水冲洗5分钟，然后用中性洗涤剂清洗，注意勿损伤试验材料。再用自来水流水冲洗