TNAIA_01092022_葡萄酒中原花青素的测定_液相色谱法.docxVIP

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团 体 标 准

T/NAIA0109—2022

葡萄酒中原花青素的测定 液相色谱法

Determinationofproanthocyanidinsinwinebyliquidchromatography

2022-03-15发布 2022-03-31实施

宁夏化学分析测试协会 发布

T/NAIA

T/NAIA0109—2022

前 言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定编写。

本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。

本文件起草单位：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监管重点实验室（枸杞和葡萄酒质量安全））、宁夏工商职业技术学院、宁夏回族自治区食品质量监督检验二站、宁夏化学分析测试协会

本文件主要起草人：汤丽华、李谦、张瑶、吴明、汪洪、吕毅、马桂娟、马雪梅、辛世华、赵瑞、张小飞。

本文件为首次发布。

葡萄酒中原花青素的测定 液相色谱法

范围

本文件规定了葡萄酒中原花青素含量测定的液相色谱的方法。

本文件适用于葡萄酒（包括白葡萄酒、红葡萄酒）中原花青素的测定。

规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

GB/T22244保健食品中前花青素的测定

DB65/T4039黑果枸杞原花青素含量的测定液相色谱法

术语和定义

原理

试样经乙酸乙酯提取，旋蒸浓缩至干，以甲醇定容，应用液相色谱法测定，经C18色谱柱分离，以保留时间定性，外标法定量。

试剂和材料

本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

试剂

甲醇:色谱纯。

乙酸乙酯：色谱纯。

标准品

原花青素标准品：纯度≥98%。

原花青素标准溶液（1.0mg/mL）：称取0.01g原花青素标准品（精确至0.001g），用甲醇

溶解定容至10mL棕色容量瓶中，此溶液临用现配。

原花青素标准工作液：根据需要，用甲醇配制适当浓度的标准工作液，临用现配。

仪器和设备

高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器。

旋转蒸发仪。

超声波清洗器。

分析天平：感量0.1mg和0.01g。

离心机：最大转速10000r/min。

纯水仪。

涡旋混合器。

分析步骤

试样制备

将所取原始样品1kg在瓷混样桶内充分混匀，将混匀样品置于洁净容器内密封，作为试样。

试样的提取

准确称取10g（精确到0.01g）试样于50mL聚四氟乙烯离心管内，分别加入20mL乙酸乙酯，涡旋混匀1min，超声提取10min后，5000r/min离心5min，取上层全部提取液转移至鸡形瓶中，重复上述操作，合并两次提取液，40℃旋转浓缩至近干，用甲醇溶解并定容至10mL，取1mL样液经0.22μm微孔滤膜过滤，待液相分析。

仪器参考条件

液相色谱参考条件

色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，粒径5μm），或性能相当者。

流动相：A为V（水）：V（乙酸）=98%：2%，B为乙腈，梯度洗脱条件见表1。

检测波长：280nm。

柱温：30℃。

进样量：10μL。

表1流动相及梯度洗脱条件

时间/min

流速/(mL/min)

流动相A/%

流动相B/%

0

1.0

90

10

8

1.0

80

20

12

1.0

60

40

15

1.0

0

100

16

1.0

90

10

20

1.0

90

10

标准曲线的制作

将标准曲线工作液按浓度由低到高的顺序各取10?L分别注入液相色谱仪，测定相应的峰面积，以标准曲线工作液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

试样溶液的测定

将试样溶液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中原花青素的质量浓度。在上述条件下，原花青素的色谱图参见附录A种图1。

分析结果的表述

试样中原花青素含量按式（1）进行计算：

X ? ?c ? c0?? v?1000 ? ? ?

?（1）

式中：

m ?1000

X ──样本中原花青素含量，单位为毫克每千克（mg/kg)；

c ──测定溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；

c0 ──空白基质溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

V ──样本溶液提取溶液体积，单位为毫升(mL)；

m ──试样质量，单位为克（g）；

注：计算结果应扣除空白值，测定结果用平行测定的算数平均值表示，保留两位有效数字。

精密度

在重复性测定条件下获得的两次独立测定结果的绝