小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性风险剖析与Bi - PASA分子检测技术应用.docxVIP

小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性风险剖析与Bi-PASA分子检测技术应用

一、引言

1.1研究背景

小菜蛾（Plutellaxylostella(L.)），属鳞翅目菜蛾科，是一种世界性迁飞害虫，在我国各地均有分布。其主要危害甘蓝、紫甘蓝、青花菜、菜心、芥菜、花椰菜、白菜、油菜、萝卜等十字花科植物。小菜蛾具有繁殖力强、发生代数多、世代重叠严重的特点，在北方每年发生4-5代，长江流域9-14代，华南地区17代，而在台湾地区可达18-19代。小菜蛾初龄幼虫仅取食叶肉，留下表皮，在菜叶上形成许多透明小斑，俗称“开天窗”；3-4龄幼虫能将菜叶食成孔洞与缺刻，严重时全叶几乎被食成网状。在苗期，小菜蛾常聚集在中心叶为害，影响包心；在留种株上，会危害嫩茎、幼荚及籽粒。由于小菜蛾的危害，全球每年受损害及治理的相关总费用达到40-50亿美元，给农业生产带来了巨大的经济损失。

长期以来，化学药剂一直是防治小菜蛾的主要手段。然而，由于小菜蛾繁殖速度快、世代更替频繁，且农民为追求防治效果，常常提高施药浓度、增加施药次数，导致小菜蛾对多种类型杀虫剂产生了抗药性。小菜蛾已对有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类、生物源类及昆虫生长调节剂类等70多种杀虫剂产生了不同程度的抗性。抗药性的产生使得传统杀虫剂的防治效果逐渐降低，农民不得不加大用药量和用药频率，这不仅增加了生产成本，还引发了蔬菜农药残留超标和环境污染等问题，对生态环境和人类健康构成了威胁。

氟虫双酰胺（Flubendiamide）是由日本农药株式会社和德国拜耳公司联合开发的新型邻苯二甲酰胺类杀虫剂。其作用机制独特，为鱼尼丁受体激活剂。鱼尼丁受体主要位于细胞肌浆网膜上，是一种分子量为560kD的相同亚单位组成的四聚体，整个蛋白质的分子量超过2300kD，是目前所知分子量最大的膜蛋白。氟虫双酰胺作用于鱼尼丁受体后，能影响鳞翅目害虫在肌肉收缩中充当关键作用的钙离子释放通道，导致细胞内钙离子释放通道打开，贮存钙离子的释放失控，刺激昆虫肌肉持续收缩，害虫停止活动和取食，引起呕吐、饥饿、脱水、脱粪，最终僵缩而死。由于其作用机理独特，与传统杀虫剂没有交互抗性，对除虫菊酯类、苯甲酰脲类、有机磷类、氨基甲酸酯类已产生抗性的小菜蛾3龄幼虫具有很好的活性。氟虫双酰胺具有很强的渗透性和内吸传导性，以触杀和胃毒作用为主，对几乎所有的鳞翅目类害虫均具有很好的活性，对成虫和幼虫都有优良的活性，作用速度快，害虫1-2个小时停止活动，大约在3-5天左右，达到死虫高峰，持效期长达20天。

然而，随着氟虫双酰胺的广泛使用，小菜蛾对其产生抗药性的风险也逐渐增加。研究表明，害虫对杀虫剂产生抗药性是一个复杂的过程，涉及到多个基因的突变和表达变化。一旦小菜蛾对氟虫双酰胺产生抗药性，将严重影响其防治效果，增加农业生产的成本和风险。因此，开展小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性风险评估及分子检测技术研究具有重要的现实意义。通过抗性风险评估，可以预测小菜蛾对氟虫双酰胺产生抗药性的可能性和速度，为合理使用氟虫双酰胺提供科学依据；而分子检测技术的建立，则可以快速、准确地检测小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性水平，及时发现抗性种群，采取有效的抗性治理措施，延缓抗药性的发展，保障农业生产的可持续发展。

1.2鱼尼丁受体及激活剂杀虫剂

鱼尼丁受体（RyanodineReceptor，RyR）的发现源于对一种天然植物碱——鱼尼丁的研究。鱼尼丁最初是从南美大枫子科灌木尼亚那（Ryaniaspeciosa）中提取出来，它不仅能用于鉴别和提纯一种重要的离子通道，还可作为天然杀虫剂。因其对一种特殊的钙离子配体门控通道具有结合专一性和很高的亲和性，该通道被命名为鱼尼丁受体。

鱼尼丁受体主要位于细胞肌浆网膜上，是由分子量为560kD的相同亚单位组成的四聚体，整个蛋白质的分子量超过2300kD，是目前所知分子量最大的膜蛋白。以同源四聚体为功能单位的RyR，在细胞内钙信号调节中发挥着关键作用。在大多数细胞里，内质网（ER）是主要的细胞内Ca2?存储和释放的细胞器；而在横纹肌里，主要承担这一功能的是肌浆网（SR）。ER和SR都含有专门的Ca2?释放通道，其中鱼尼丁受体就是重要的Ca2?释放通道之一。根据特异性结合配体，钙释放通道可分为鱼尼丁受体（RyR）和1,4,5-三磷酸肌醇受体（IP?R），在正常情况下，二者其中一个系统启动，另一个系统处于备用状态；在意外情况下，一个系统出现故障，另一个系统可启动，以此保证细胞的正常信号传导。

在动物体内，存在多种类型的鱼尼丁受体。以哺乳动物为例，就有RyR1、RyR2和RyR3三种亚型。RyR1主要在骨骼肌中表达，与肌肉