藤黄健骨胶囊调控AMPK_PGC-1α信号通路改善膝骨关节炎大鼠基质代谢失衡和线粒体生物发生.pdfVIP

藤黄健骨胶囊调控AMPK/PGC-1α信号通路改善膝骨关节炎大鼠

基质代谢失衡和线粒体生物发生

1,2,31,2*111111111

颜春鲁，安方玉，王霞霞，张捷，宋佳眙，王玉洁，高鹏，常伟荣，贾雪茹，石杨洋，杨帆，

111

肖小龙，苏军昌，肖志攀(1.甘肃中医药大学，兰州

730000；2.甘肃省高校重大疾病分子医学与中医药防治研究重点实验室，兰州

730000；3.甘肃省中医药研究中心，兰州

730000)

摘要：目的探讨藤黄健骨胶囊对膝骨关节炎大鼠基质代谢的影响及分子机制。方法60只SD大鼠随机分为假手术组、

−1−1

模型组、阳性药组(硫酸氨基葡萄糖胶囊0.17g·kg)及藤黄健骨胶囊高、中、低剂量治疗组(藤黄健骨胶囊0.36、0.18、0.09

g·kg)，

每组10只。除假手术组外，其他各组采用改良Hulth法制备膝关节骨关节炎(knee

osteoarthritis，KOA)大鼠模型，建模

6周后分别灌胃给予硫酸氨基葡萄糖及相应剂量的藤黄健骨胶囊，假手术组和模型组灌胃给予0.9%生理盐水。上述药物

连续灌胃2个月后采用Lequesne膝关节级别评分法评估大鼠右膝对疼痛的刺激反应步态改变、关节活动度和关节的肿胀

程度，番红固绿O染色法观察关节软骨病理形态并进行OARSI评分；ELISA法检测血清中核心结合因子β亚基(core-

binding

factor

subunit

beta，Cbf-β)、基质金属蛋白酶13(matrix

metalloproteinase

13，MMP-13)、组织金属蛋白酶抑制剂

2(tissue

inhibitor

of

metalloproteinase

2，TIMP-2)、Ⅱ型胶原羧基末端肽(type

II

collagen

carboxy

terminal

peptide，CTX-

Ⅱ)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶4(a

disintegrin

and

metalloproteinase

with

thrombospondin

4，ADAMTS-4)和血小板

反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS-5)浓度；RT-PCR法和Western

blotting观察关节软骨组织中单磷酸腺苷激活的蛋

白激酶(AMP-

activated

protein

kinase，AMPK)、过氧化物酶增殖激活受体γ共激活子-1α(peroxisome

proliferator-activated

receptor

γ

coactivator-1α，PGC-1α)、MMP-13

mRNA表达和蛋白表达。结果与假手术组比较，模型组Lequesne

MG评分

呈现增加，血清Cbf-β、MMP-13、CTX-Ⅱ、ADAMTS-4、ADAMTS-5浓度明显上升，MMP-13

mRNA表达和蛋白表达则

明显上升，模型组和藤黄健骨低剂量组大鼠OARSI评分也明显上升，而血清TIMP2浓度明显下降，右膝关节软骨组织

PGC-1α、AMPK

mRNA表达也明显下降(P0.01)。与模型组比较，藤黄健骨胶囊高剂量组大鼠血清ADAMTS-5浓度明显

下降、TIMP-2浓度明显上升(P0.01)，藤黄健骨胶囊中、高剂量组Lequesne

MG评分、OARSI评分、血清Cbf-β、CTX-

Ⅱ和ADAMTS-4含量均明显下降，右膝关节软骨组织PGC-1α蛋白表达及蛋白表达灰度值明显增强(P0.05或P0.01)，

藤黄健骨胶囊低、中、高剂量组大鼠血清MMP-13含量、MMP-13

mRNA表达、蛋白表达及蛋白表达灰度值明显下降，右

膝关节软骨组织AMPK、PGC-1α

mRNA表达明显上升，AMPK蛋白表达及蛋白表达灰度值也明显增强(P0.01)。结论

藤黄健骨胶囊延缓KOA模型大鼠的关节软骨退变可能与维持其关节软骨组织基质代谢稳态和逆转线粒体生物发生损伤有

关，其中AMPK/PGC-1α信号通路激活可能发挥着关键调控作用。

关键词：骨藤黄健骨胶囊；膝骨关节炎；AMPK/