细胞工程培养细胞常规检查和特性鉴定.pptVIP

液氮罐第29页，共40页，星期日，2025年，2月5日冻存温度。是指能长久保存细胞的一个深低温度。在这样的温度下，细胞生化反应极其缓慢或停止，经长期保存和复苏后仍能保持正常的结构和功能。从实际和效益的观点出发，液氮温度（﹣196℃）是目前最佳冷冻保存温度。冷冻速度融冻速度冷冻保护剂（三）影响细胞冻存的因素第30页，共40页，星期日，2025年，2月5日细胞工程培养细胞常规检查和特性鉴定第1页，共40页，星期日，2025年，2月5日第一章绪论4个学时

第二章实验室配置及基本技术2个学时

第三章植物细胞工程的理论基础4个学时

第四章植物组织器官培养技术6个学时

第五章植物细胞培养及次生代谢产物生产3个学时

第六章原生质体培养和体细胞杂交3个学时

第七章人工种子及植物种质资源保存2个学时

第八章胚胎干细胞培养2个学时第九章动物细胞培养4个学时

第十章动物细胞融合与单克隆抗体4个学时

第十一章动物组织与胚胎工程1个学时

第十二章试管动物与克隆动物1个学时

课程初步安排：36学时

第2页，共40页，星期日，2025年，2月5日第八章动物细胞培养第一节动物细胞体外培养方法第二节体外培养动物细胞的生物学特性第三节培养细胞常规检查和特性鉴定第四节动物细胞的低温保存第五节细胞同步化第六节器官培养（自学）第3页，共40页，星期日，2025年，2月5日第三节培养细胞常规检查和特性鉴定一、培养细胞常规检查（一）肉眼观察培养物颜色及混浊度（二）倒置显微镜观察细胞生长状态（三）培养细胞的污染检测和排除二、细胞系的鉴定第4页，共40页，星期日，2025年，2月5日第5页，共40页，星期日，2025年，2月5日（三）培养细胞的污染检测和排除培养细胞的污染：混入培养环境中对细胞生长有害的成分和造成细胞不纯的异物，包括：－微生物（真菌、细菌、病毒和支原体）－化学物质（影响细胞生存非细胞所需的化学成分）－细胞（非同一种的其他细胞）第6页，共40页，星期日，2025年，2月5日常见微生物污染。微生物污染包括细菌、酵母菌、霉菌和病毒污染。无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等是主要污染源。严格之无菌操作技术、清洁的环境以及品质良好之细胞来源和培养基严格无菌配制是减低污染之最好方法。第7页，共40页，星期日，2025年，2月5日1、微生物污染及其排除微生物污染的途径微生物污染对细胞的影响微生物污染的检测微生物污染的防治第8页，共40页，星期日，2025年，2月5日a.空气：空气流动性大，如隔离不严，易造成不洁空气的污染。b.器材：培养器皿、器械，CO2培养箱。c.操作：无菌观念不强。d.血清：质量不好、检查不严。e.组织样本：避免用碘消毒。第9页，共40页，星期日，2025年，2月5日由于体外培养细胞自身没有抵抗污染的能力，而且培养基中加入的抗菌素的抗污染能力也有限，因而培养细胞一旦发生污染多数将无法挽救。1）一般在细胞受到有害物污染早期或污染程度较轻时，如果能及时处理并去除污染物，部分细胞有可能恢复。2）当污染物持续存在培养环境中，轻者细胞生长缓慢，分裂相减少，细胞变得粗糙，轮廓增强，细胞质出现较多的颗粒状物质；较重者细胞增殖停止，分裂相消失，细胞质中出现了大量堆积物，细胞变圆或崩解，从瓶壁脱落。3）不同微生物污染物对细胞的影响也有差别，支原体和病毒对细胞形态和机能的影响是长期、缓慢和潜在的；霉菌和细菌繁殖迅速，能在很短时间内抑制细胞生长或是产生有毒物质杀灭细胞。第10页，共40页，星期日，2025年，2月5日真菌的污染真菌的种类很多，污染培养细胞的多为烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白色念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物，一般肉眼可见。短期内培养液多不混浊。倒置显微镜下可见在细胞间有纵横交错穿行的丝状、管状及树枝状菌丝悬浮飘荡在培养液中。高倍镜下可见到很多菌丝有链状排列的菌珠，念珠菌或酵母菌形态呈卵形，散在细胞周边和细胞之间生长。第11页，共40页，星期日，2025年，2月5日细菌污染细菌的污染较为多见是大肠杆菌，白色葡萄球菌，假单胞菌等。加用抗菌素的培养用液一般可