聚羟基丁酸酯颗粒赋能重组人组织纤溶酶原激活剂表达的机制与应用探索.docxVIP

聚羟基丁酸酯颗粒赋能重组人组织纤溶酶原激活剂表达的机制与应用探索

一、绪论

1.1聚羟基脂肪酸酯（PHA）概述

1.1.1PHA简介

聚羟基脂肪酸酯（Polyhydroxyalkanoates，PHA）是一类由微生物合成的生物高分子聚合物，在自然界中广泛存在，尤其是在污水处理厂、农业和工业环境里。当微生物处于碳源过量，而氮、磷、镁等其他营养物质匮乏的失衡环境时，为了储存多余的碳源和能量，便会合成PHA。它的通式可写成：单体数目8，其中，m=1，2或3，n为单体数目，R代表侧链，多为C1-C13的不同链长的正烷基，也可以是支链、不饱和的或带取代基的烷基。根据单体的碳原子数，PHA可被分为两类：短链长度（short-chain-length，SCL）PHA，单体中含有3-5个碳原子；中链长度（medium-chain-length，MCL）PHA，单体中含有6-14个碳原子。

PHA具有良好的生物可降解性，能在自然环境中被微生物分解为水和二氧化碳，不会造成环境污染，有效解决了传统塑料带来的“白色污染”问题。同时，它还具备生物相容性，这使得PHA在生物医学领域如组织工程支架、药物载体等方面有着广泛的应用前景。其独特的压电性、光学活性等特殊性能，使其在电子器件、光学材料等领域也展现出巨大的应用潜力。此外，PHA的合成原料为可再生资源，这符合可持续发展的理念，在工业领域，PHA可以用于制造各种塑料制品，如袋子、餐具、包装材料等，在农业领域，可用于农用薄膜、缓释肥料等。因此，PHA作为一种新型的生物材料，在多个领域都具有重要的应用价值，受到了广泛的关注和研究。

1.1.2PHA的形成模型

PHA在微生物体内的形成是一个复杂而精细的过程，受到多种因素的调控。当微生物感知到外界环境中碳源丰富，而氮、磷、硫等其他关键营养元素相对匮乏时，细胞内的代谢途径会发生一系列的变化，从而启动PHA的合成机制。

在这个过程中，微生物首先会摄取环境中的碳源，如糖类、脂肪酸、醇类等，并将其转化为乙酰辅酶A。乙酰辅酶A是细胞代谢过程中的关键中间产物，也是PHA合成的重要前体物质。接下来，乙酰辅酶A会在一系列酶的催化作用下，逐步转化为PHA的单体——羟基脂肪酸。这些单体在PHA合成酶的作用下，发生聚合反应，形成高分子量的PHA聚合物，并以颗粒的形式积累在细胞内。

在这个过程中，涉及到多种酶的参与，如β-酮硫解酶、乙酰乙酰辅酶A还原酶、PHA合成酶等。这些酶的活性和表达水平，会直接影响PHA的合成速率和产量。环境因素，如温度、pH值、溶解氧等，也会对PHA的合成产生重要影响。适宜的环境条件能够促进微生物的生长和代谢，从而提高PHA的产量；反之，不利的环境条件则可能抑制PHA的合成。

1.1.3聚羟基丁酸酯（PHB）

聚羟基丁酸酯（Polyhydroxybutyrate，PHB）是短链PHA（SCL-PHA）中最具代表性且研究最为深入的一种。它由微生物在特定条件下合成，是一种高度结晶的热塑性聚酯。PHB的化学结构由重复的β-羟基丁酸单元组成，这些单元通过酯键相互连接，形成线性高分子链。其分子链具有规整的结构，使得PHB具有较高的结晶度，结晶度范围通常在55%-80%之间。这种高结晶度赋予了PHB许多独特的物理性质，使其在物理性质甚至分子结构上与聚丙烯（PP）颇为相似，例如二者在熔点、玻璃态温度、结晶度、抗张强度等方面较为接近。

在细胞中，PHB以不溶性的纳米粒或微粒形式存在，犹如一个个微小的储能“仓库”。这些颗粒内部是由疏水性的无定形聚合物构成的核心，外部则被一层磷脂膜紧密包裹。这层磷脂膜不仅起到了保护PHB核心的作用，还为膜上结合的多种蛋白提供了附着位点，使得PHB颗粒能够与细胞内的其他组分进行有效的相互作用。

1.1.4PHB的生物合成

PHB的生物合成是一个涉及多种酶和代谢途径的复杂过程。在微生物细胞内，主要存在一条经典的合成途径，该途径从乙酰辅酶A开始，经过三步关键反应最终合成PHB。

首先，在β-酮硫解酶（β-ketothiolase，由phbA基因编码）的催化作用下，两分子的乙酰辅酶A发生缩合反应，生成乙酰乙酰辅酶A。这一反应是PHB合成途径的起始步骤，它将细胞内的基本代谢产物乙酰辅酶A转化为合成PHB的直接前体之一。

随后，乙酰乙酰辅酶A在依赖NADPH的乙酰乙酰辅酶A还原酶（stereo-specificreductase，由phbB基因编码）的作用下，发生还原反应，转变为D-（-）