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核酸分子杂交技术

第一节核酸分子杂交的基本原理

具有互补序列两条单链核酸分子在一定条件下按碱基互补配对原则退火形成双链的过程。杂交的双方是待测核酸和已知核酸序列，已知核酸序列称探针。杂交有固一液相杂交和液相杂交。

变性复性DNA-DNA杂交双链分子

定义：某些理化因素导致两条DNA链间的氢链断裂变为单链的过程，称DNA变性DNA变性一、DNA变性与复性

2、变性的方法：热变性：温度升高到90~100℃时，双链核酸分子链间的氢键完全断裂。酸碱变性：pH值低于3或高于10时，双链核酸分子链间的氢键断裂。化学试剂变性：如尿素、甲酰胺、甲醛等使双链核酸分子链间的氢键断裂。

变性后的理化性质变化：粘度降低紫外吸收值增加密度增加

DNA变性曲线AT区先解链GC区后解链阶梯式曲线

01GC含量与Tm值之间的关系（G+C）%=（Tm-69.3)×2.44Tm=(G+C)%×0.41+69.30203

定义：变性的单链核酸分子在一定条件下按碱基互补原则重新结合为双链核酸的过程，称复性或杂交。具有互补序列的两条单链核酸都可互补形成双链：DNA/DNA、RNA/DNA、RNA/RNA、寡核苷酸/DNA和寡核苷酸/RNA。（二）复性

单链分子间碰撞形成局部双链01局部双链周围的碱基如不配对时，双链重新解离02局部双链周围的碱基如配对，则形成中心序