天津大学《生物技术》课件-pUC系列质粒载体.pdfVIP

质粒载体举例--pUC系列质粒载体

•UniversityofCalifornia

•pUC载体是在pBR322质粒载体的基础上，组入了一个在其5′-端带

有一段多克隆位点的lacZ′基因，而发展成为具有双功能检测特性

的新型质粒载体系列。

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pUC质粒载体的结构

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一种典型的pUC系列的质粒载体，包括如下四个组成部分：

ü来自pBR322质粒的复制起点（ori）；

r

ü氨苄青霉素抗性基因（amp）；

ü大肠杆菌β-半乳糖酶基因（lacZ）的启动子及其编码α-肽链的

DNA序列，此结构特称为lacZ′基因；

ü位于lacZ′基因中的靠近5′-端的一段多克隆位点（MCS）区段，

但它并不破坏该基因的功能。

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带有LacZ基因的载体可以结合-互补现象来筛选：

-互补现象：

因为许多载体都带有一个LacZ基因的调控序列和146个氨基酸的编

码信息，编码-互补肽，该肽段能与宿主编码的缺陷型-半乳糖苷酶

实现基因内互补（-互补）。当这种载体转入可编码－半乳糖苷酶C

端部分序列的宿主细胞中时，在异丙基--D硫代半乳糖苷（IPTG）的

诱导下，宿主可同时合成这两种肽段，虽然它们各自都没有酶活性，

但它们可以融为一体形成具有酶活性的蛋白质。所以称这种现象为-

互补现象。

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由互补产生的－半乳糖苷酶(LacZ)能够作用于生色底物5－溴

－4－氯－3－吲哚－－D－半乳糖苷(X-gal)而产生蓝色的菌落，

所以利用这个特点，在载体的该基因编码序列之间人工放入一个多

克隆位点，当插入一个外源DNA片段时，会造成LacZ()基因的失活，

破坏-互补作用，就不能产生具有活性的酶。所以，有重组质粒的

菌落为白色，而没有重组质粒的菌落为蓝色。

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重组DNA转化细菌过

程示意图

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X-gal

•Allolactose(异乳糖)isanisomeroflactoseandisthe

inducerofthelacoperon.Lactoseisgalactose-(β1-4)-

glucose,whereasallolactoseisgalactose-(β1-6)-glucose.

X-gal:5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷

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IPTG

•异丙基-β-D-硫代半乳糖苷

•Isopropyl-β-D-thio-galactoside

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Recreatedvector:bluetransformants

Recombinantplasm