Chemerin影响雄性肥胖小鼠的睾酮分泌及其在糖脂代谢调控中的作用.pdfVIP

摘要

研究目的

大量研究表明血清及外周代谢器官chemerin的水平与肥胖、2型糖尿病等疾

病的糖脂代谢紊乱程度正相关，但其作用机制仍未完全阐明。近几年有研究报道

了脂肪因子chemerin及其受体CMKLR1在人类、啮齿动物和鸡的睾丸间质细胞

（分泌睾酮的主要细胞）中高表达；CMKLR1功能性缺失会导致睾酮及雄激素

受体（AR）的水平下降。而睾酮水平低下会导致男性肥胖以及糖脂代谢异常。我

们前期研究利用去势手术、AR激动剂S4和AR拮抗剂氟他胺，证实了睾酮/AR

在维持雄性小鼠正常糖脂代谢中的重要作用。本研究的目的包括：（1）利用全身

性chemerin敲除（chemerin全敲）小鼠探究chemerin缺失对正常和肥胖的雄性

小鼠糖脂代谢的影响，是否与其调控睾酮分泌有关。（2）若有关，chemerin缺失

是否是通过影响睾酮合成关键酶以及睾酮合成原料（如胆固醇水平）来调控雄性

小鼠睾丸间质细胞分泌睾酮。（3）探究chemerin-睾酮信号是否参与了有氧运动

对雄性肥胖小鼠糖脂代谢的改善作用。

研究方法

第一部分Chemerin全敲对正常和肥胖雄性小鼠糖脂代谢的影响

6周龄雄性的chemerin全敲[chemerin(-/-)]和野生型（WT）小鼠分别饲喂普

通饲料和高脂饲料22周，高脂饲料用于诱导肥胖小鼠模型。将小鼠分为4组：

WT组、chemerin(-/-)组、Obesity-WT组和Obesity-chemerin(-/-)组，每组8只。

饮食干预结束后，测量小鼠的体重、空腹血糖（FBG）、口服葡萄糖耐量（OGTT）、

胰岛素耐量（ITT）、体成分和能量代谢，HE染色观察小鼠肝脏和不同部位脂肪

组织的脂滴含量。收集小鼠血液，检测血清胰岛素和血脂指标[包括甘油三酯

（TG）、胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇

（LDL-C）]。

第二部分Chemerin全敲对正常和肥胖雄性小鼠睾酮水平的影响及其机制

分离WT组、chemerin(-/-)组、Obesity-WT组和Obesity-chemerin(-/-)组小鼠

的睾丸并称重，ELISA检测血清睾酮水平，Westernblot检测睾丸的AR蛋白水

平。制备睾丸石蜡切片进行HE染色探究其结构是否出现变化。睾丸冰冻切片进

行油红O染色、Bodipy染色和Filipin染色，并测定睾丸中TG和TC水平研究

睾丸脂质代谢是否出现异常。qRT-PCR检测睾酮合成关键酶相关转录因子[包括

类固醇生成因子1（SF-1）、胰岛素样蛋白3（INSL3）、核受体4A1（NR4A1）

和GATA结合蛋白4（GATA4）]的mRNA水平，Westernblot检测睾丸中睾酮

合成关键酶[包括类固醇急性调节蛋白（STAR）、P450胆固醇侧链裂解酶

（CYP11A1）和3β-羟基类固醇脱氢酶2（HSD3B2）]，胆固醇摄取相关蛋白[包

括清道夫受体B类I型蛋白（SRBI）和低密度脂蛋白受体（LDLR）]，胆固醇合

成相关蛋白[包括3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGCR）和胆固醇调节

元件结合蛋白2（SREBP2）]，以及胆固醇流出相关蛋白[包括肝脏X受体β（LXRβ）

和ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）]的蛋白表达水平。

为证实chemerin对睾丸间质细胞分泌睾酮的调节作用及机制，我们提取3

月龄chemerin(-/-)小鼠和WT小鼠的睾丸间质细胞，ELISA测定细胞培养上清液

的chemerin和睾酮水平，qRT-PCR检测细胞中chemerin、CMKLR1、AR和睾酮

合成关键酶（STAR、CYP11A1和HSD3B2）的mRNA水平。进一步，用不同浓

度（0、50、100、200ng/mL）的外源性chemerin处理睾丸间质细胞，干预48h

后，ELISA测定细胞培养上清液的睾酮水平。

第三部分Chemerin全敲对睾酮分泌的调控参与有氧运动对肥胖雄性小鼠糖脂

代谢的改善作用

6周龄的雄性chemerin(-/-)小鼠