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第三章细胞融合与单克隆抗体

3.1细胞融合(cellfusion)01单击此处添加小标题定义:在离体条件下用人工的方法把02单击此处添加小标题不同种的细胞通过无性方式融03单击此处添加小标题合成一个杂合细胞的技术。

细胞融合的发展历史“自发”细胞融合现象：1838年Muller多核的肿瘤细胞1858年Virchow正常组织、发炎组织及肿瘤组织——多核细胞1873年Luginbuhl天花病人——多核体血细胞1875年Lange蛙类血液细胞发生合并

重要事件70年代,(华裔加籍)高国楠PEG促植物原生质体的融合1962年,(日)冈田善雄仙台病毒促细胞融合80年代，电融合

植物细胞融合：01单击此处添加小标题1978年（德）梅歇尔斯——“potomo”02单击此处添加小标题1972年（美）——杂种烟草现代植物细胞融合的开始

“Pomoto”

植物原生质体培养植物细胞融合植物原生质体培养与细胞融合

(ProtoplastandCellfusion)

3.1.3动物细胞融合动物细胞融合是研究细胞遗传信息转移，基因在染色体上的定位以及创造新细胞株的有效途径。

肿瘤细胞与树突状细胞的融合

1978年人纤维肉瘤细胞与小鼠畸胎瘤细胞融合(瑞士)埃勒门斯(美国)柯路斯

3.1.4细胞融合的诱导诱导融合的方法:物理法:电场刺激激光显微操作化学法:聚乙二醇(PEG)结合高pH、高钙离子法生物法:仙台病毒

不同细胞融合的条件及其主要应用来源前处理融合方法主要应用动物细胞不需仙台病毒、PEG、电融合生产单克隆抗体植物细胞脱壁PEG、电融合创造植物新品种微生物细胞脱壁PEG高产优质新菌种

仙台病毒诱导也称日本血凝病毒HVJ，属粘病毒副流感类群，是RNA病毒，多型颗粒状，易在小鼠中蔓延。仙台病毒(Sendalvirus)

融合的可能机制：仙台病毒诱导病毒被膜含有糖蛋白，其表面还分布有许多具有神经氨酸酶和凝血活性的突起，神经氨酸酶可降解细胞膜上的糖蛋白，使细胞膜局部凝集，再通过膜上蛋白质分子的重新分布，使膜中的脂类分子重排，而打开质膜，导致细胞融合。

融合过程：病毒颗粒进入细胞质，此时两个细胞合并、通道，细胞质流通、融汇。0437℃温浴后，粘结部位的细胞膜破坏，形成发生融合。03单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。粘着成堆，在4℃冰浴中细胞紧密靠近，但不02单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。病毒颗粒附着细胞膜上起搭桥作用，使细胞01细胞核也相互合并,完成细胞融合变圆，完成融合，全过程约15～30分钟。05仙台病毒诱导

仙台病毒诱导

PEG诱导PEG——聚乙二醇(polyethyleneglycol)商品名：卡波蜡(carbowax)多聚化合物，分子式H(OCH2·CH2)nOH实验室用PEG平均分子量在200－20,000一般：1,000——液体1,000——固体常用分子量：4000—6000PEG诱导

融合的可能机制PEG诱导？改变膜表面电荷或膜电位，而导致膜上蛋白质颗粒聚集及膜脂分子随之发生重排之故。？脱水作用能使细胞凝聚，并使膜结构发生变化

可能是由于带有大量负电荷的PEG分子和原生质体表面的负电荷间，在钙离子的连接下形成静电键，促使异源的原生质体间的粘着和结合，在高pH、高钙离子溶液的作用下，将钙离子和与质膜结合的PEG分子洗脱，导致电荷平衡失调并重新分配，使两种原生质体上的正负电荷连接起来，进而形成具有共同质膜的融合体。PEG诱导初步分析

PEG诱导过程注意事项：PEG诱导悬浮法：将细胞悬于40～50％的PEG4000进行溶，处理1～2分钟为宜。离心法：先将细胞混合物悬于30～40％的PEG4000，再离心进行融合，则可适当延长融合时间，以5～8分钟为宜。控制与分子量、浓度和处理时间

PEG诱导注意事项：PEG诱导pH值以pH7.4~8.0为宜，或略偏碱性单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。您的内容已经简明扼要，字字珠玑，但信息却千丝万缕、错综复杂，需要用更多的文字来表述；但请您尽可能提炼思想的精髓，否则容易造成观者的阅读压力，适得其反。pH8.0~8.2。辅以5～15％的DMSO或在融合前用PHA处理一下，效果更好。

PEG融合法优点PEG融合法缺点效率高材料方便，