第九章基因工程.pptVIP

第九章基因工程第1页，共40页，星期日，2025年，2月5日第2页，共40页，星期日，2025年，2月5日第3页，共40页，星期日，2025年，2月5日第4页，共40页，星期日，2025年，2月5日转基因植物获得新的性状返回第5页，共40页，星期日，2025年，2月5日返回把大鼠生长因子转入小鼠得到巨大型的转基因小鼠。第6页，共40页，星期日，2025年，2月5日返回用噬菌体DNA构建重组DNA分子第7页，共40页，星期日，2025年，2月5日返回用质粒构建重组DNA分子第8页，共40页，星期日，2025年，2月5日基因重组(generecombination)是指DNA片段在细胞内、细胞间，甚至在不同物种之间进行交换，交换后的片段仍然具有复制和表达的功能。基因工程(geneticengineering）是指采用人工方法将不同来源的DNA进行重组，并将重组后的DNA引入宿主细胞中进行增殖或表达的过程。第9页，共40页，星期日，2025年，2月5日第10页，共40页，星期日，2025年，2月5日第11页，共40页，星期日，2025年，2月5日重组DNA技术重组DNA技术又称为基因工程（geneticengineering）或分子克隆(molecularcloning)。基因工程的操作过程主要由以下步骤组成：①载体和目的基因的分离；②载体和目的基因的切断；③载体和目的基因的重组；④重组DNA的转化和扩增；⑤重组DNA的筛选和鉴定。第12页，共40页，星期日，2025年，2月5日第13页，共40页，星期日，2025年，2月5日一、载体和目的基因的分离为了进行基因重组，首先需要对载体DNA和目的基因分别进行分离纯化，得到其纯品。（一）载体：基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒(plasmid)、噬菌体(phage)和病毒(virus)三大类。这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。第14页，共40页，星期日，2025年，2月5日1．质粒：是存在于天然细菌体内的一种独立于细菌染色体之外的双链环状DNA，具有独立复制的能力，通常带有细菌的抗药基因。最早使用的质粒DNA是人工构建的pBR322，该质粒分子大小为4.3kb，带有抗四环素和抗氨苄青霉素基因，含EcoRⅠ，BamHⅠ，HindⅢ等单一的限制酶切点。第15页，共40页，星期日，2025年，2月5日第16页，共40页，星期日，2025年，2月5日第17页，共40页，星期日，2025年，2月5日3．病毒：常用的为SV40，通过感染方式将其DNA送入哺乳动物细胞中进行增殖。目前应用相对较少。第18页，共40页，星期日，2025年，2月5日（二）目的基因：目的基因的筛选和分离可采用以下方法进行：1．直接从染色体DNA中分离：仅适用于原核生物基因的分离，较少采用。第19页，共40页，星期日，2025年，2月5日2．人工合成：根据已知多肽链的氨基酸顺序，利用遗传密码表推定其核苷酸顺序再进行人工合成。适应于编码小分子多肽的基因。第20页，共40页，星期日，2025年，2月5日第21页，共40页，星期日，2025年，2月5日4．从基因文库中筛选：将某一种基因DNA用适当的限制酶切断后，与载体DNA重组，再全部转化宿主细胞，得到含全部基因组DNA的种群，称为G文库(genomicDNAlibrary)。将某种细胞的全部mRNA通过逆转合成cDNA，然后转化宿主细胞，得到含全部表达基因的种群，称为C-文库(cDNAlibrary)。C-文库具有组织细胞特异性。第22页，共40页，星期日，2025年，2月5日第23页，共40页，星期日，2025年，2月5日第24页，共40页，星期日，2025年，2月5日二、载体和目的基因的切断通常采用限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease)，简称限制酶，分别对载体DNA和目的基因进行切断，以便于重组。限制酶目前已经发现400多种，所识别的顺序往往为4-8个碱基对，且有回文结构。由限制酶切断后的末端可形成平端、3-突出粘性末端和5-突出粘性末端三种情况。形成粘性末端(cohesiveend)者较有利于载体DNA和目的基因的重组。第25页，共40页，星期日，2025年，2月5日三、载体和目的基因的重组即将带有切口的载体与所获得的目的基因连接起来，得到重新组合后的DNA分子。