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基本原理与主要分离类型第1页，共34页，星期日，2025年，2月5日一、基础理论热力学理论：塔板理论——平衡理论动力学理论：速率理论——Vander方程1.塔板理论第2页，共34页，星期日，2025年，2月5日（1）2.速率理论（与GC对比）第3页，共34页，星期日，2025年，2月5日2）涡流扩散项及其影响（2）讨论：1）流动相流速对HPLC板高的影响（与GC对比）第4页，共34页，星期日，2025年，2月5日第5页，共34页，星期日，2025年，2月5日3）传质阻抗项及其影响第6页，共34页，星期日，2025年，2月5日二、影响分离的因素1.第7页，共34页，星期日，2025年，2月5日1.固定相与装柱方法的选择：选粒径小的、分布均匀的球形固定相（dp≤10μm）首选化学键合相，匀浆法装柱2.流动相及其流速的选择：选粘度小、低流速的流动相——甲醇，约1ml/min3.柱温的选择：选室温250C左右三、HPLC法中分离条件的选择第8页，共34页，星期日，2025年，2月5日1.液固吸附色谱法（LSC）(liquid-solidadsorptionchromatography)2.液液分配色谱法（LLC）(liquid-liquidpartitionchromatography,chemicalbondedphasechromatography3.离子色谱法（IC）（ion-exchangechromatographyandionpairchromatography)4.空间排阻色谱法（SEC）（stericexclusionchromatography四、HPLC法的主要类型第9页，共34页，星期日，2025年，2月5日一、液-固吸附色谱

liquid-solidadsorptionchromatography1.基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；作用机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异分离前提：K不等第10页，共34页，星期日，2025年，2月5日2.固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；影响K的因素：与固定相性质和流动相性质有关溶质分子极性↑，洗脱能力↓，K↑，tR↑溶剂系统极性↑，洗脱能力↑，K↓，tR↓注：调节溶剂极性，可以控制组分的保留时间第11页，共34页，星期日，2025年，2月5日二、液-液分配色谱及化学键合相色谱

liquid-liquidpartitionchromatography固定相与流动相均为液体（互不相溶）；基本原理：组分在固定相和流动相中溶解度差异；固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；多用化学键合固定相流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相normalphase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相reversephase）。正相与反相的出峰顺序相反；第12页，共34页，星期日，2025年，2月5日正相色谱——固定液极性流动相极性（NLLC）极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱适于分离极性组分。反相色谱——固定液极性流动相极性（RLLC）极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱适于分离非极性组分。化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。第13页，共34页，星期日，2025年，2月5日1.常规化学键合相利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面（1）分离机制：分配+吸附不易流失热稳定性好化学性能好载样量大适于梯度洗脱第14页，共34页，星期日，2025年，2月5日2.反相键合相固定相（1）分离机制：疏溶剂理论正相——流动