第二章微生物的纯培养和显微技术.pptVIP

培养物（culture）：在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物。

纯培养物（pureculture）：只有一种微生物的培养物称为纯培养物。

纯培养技术是进行微生物学研究的基础，是微生物学的基本技术之一。显微技术是进行微生物研究的另一项重要技术。正是由于显微技术和纯培养技术的建立，才使我们得以认识丰富多彩的微生物世界，对其真正研究，使其发展为一门学科。;第一节微生物的分离和纯培养

第二节显微镜和显微技术

第三节显微镜下的微生物;第一节微生物的分离和纯培养;现在是4页\一共有62页\编辑于星期四;现在是5页\一共有62页\编辑于星期四;固体培养基是用琼脂或其他凝胶物质固化的培养基。

细菌的固体培养特征：

菌落（colony）：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落。每个菌落一般是由单个微生物活体细胞生长、繁殖形成的纯培养物。;菌落特征：有光滑型、粗糙型和粘液型三种。

如湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易挑起、质地均匀、菌落正反面及边缘与中央部分的颜色一致。

生物学意义：不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落（或菌苔）一般都具有稳定的特征，是微生物分类鉴定的指征之一。

菌苔（lawn）：当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔（lawn）。;菌落;现在是9页\一共有62页\编辑于星期四;目前实验室常用固体培养基获得微生物纯培养物的几种方法：

1、涂布平板法（spreadplatemethod)

2、稀释倒平板法(pourplatemethod，50℃左右)

3、平板划线法(streakplatemethod)（如四区划线）

4、稀释摇管法(shaketubemethod);涂布平板法与稀释倒平板法;平板划线法;稀释摇管法（分离厌氧菌）;三、用液体培养基获得纯培养---稀释法

适用于一些个体大的细菌、许多原生动物和藻类等。通过高度稀释，使一支试管中分配不到一个微生物。同一个稀释度应有较多的平行试管。

四、单细胞（孢子）分离---显微分离法

对操作技术要求较高，在显微镜下用毛细管或显???针、钩、环等挑取单个微生物细胞或孢子以获得纯培养。;1、选择平板培养

根据待分离微生物的特点选择不同的培养条件（对于从自然界中分离、寻找有用的微生物十分重要，如从土壤中筛选蛋白酶产生菌，分离高温菌，分离某种抗菌素抗性菌株）

2、富集培养

加富性选择培养基（投其所好）--对羟基苯甲酸

抑制性选择培养基（取其所抗）--致病性肠道杆菌;现在是16页\一共有62页\编辑于星期四;六、微生物的保藏技术

菌种保藏就是根据菌种特性及保藏目的的不同，给微生物菌株以特定的条件，使其存活而得以延续。

保藏的方法：

传代培养保藏4℃

冷冻保藏-196℃，-70℃，-30～-20℃

干燥保藏法沙土管，安瓿管（冷冻真

空干燥保藏，最普遍最重要）;第二节显微镜和显微技术;现代显微技术不仅仅是观察物体的形态、结构，而且发展到对物体的组成成分的定性和定量，特别是与计算机技术结合出现的图像分析、模拟仿真等技术，为探索微生物的奥秘提供了强大武器。;一、显微镜的种类及原理

1、普通光学显微镜;现在是21页\一共有62页\编辑于星期四;2、暗视野显微镜;3、相差显微镜

4、荧光显微镜（激光共聚焦显微镜）;5、透射电子显微镜;6、扫描电子显微镜

7、扫描隧道显微镜;二、显微观察样品的制备

1、光学显微镜的制样

（1）活体观察：压滴法

悬滴法

菌丝埋片法（玻璃纸，涂布

放线菌或霉菌孢子悬液，培养，镜下）;（2）染色观察

;现在是28页\一共有62页\编辑于星期四;革兰染色法（GramStain);2、电子显微镜的制样

（1）透射电镜的样品制备

1）负染技术

2）投影技术

3)超薄切片技术：取材→固定→脱水→浸透与包埋→切片→捞片→染色→观察;现在是31页\一共有62页\编辑于星期四;（2）扫描电镜的样品制备

利用电子束作光栅状扫描以取样