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菠萝叶纤维脱胶毕赤酵母工程菌的构建、表达及应用探究

一、引言

1.1研究背景

菠萝作为热带和亚热带地区广泛种植的水果，其产量丰富。据统计，全球每年菠萝产量超过1.3亿吨，而菠萝叶作为菠萝种植的副产物，数量巨大。然而，目前菠萝叶的利用率仅为10%左右，大部分菠萝叶被当作农业废弃物丢弃，不仅造成资源浪费，还可能对环境产生负面影响。菠萝叶纤维是一种天然纤维素纤维，具有诸多优良特性。其纤维呈白色，有丝状光泽，单纤维长度较短，在纺纱加工时采用工艺纤维。菠萝叶纤维的强度和断裂伸长介于亚麻与黄麻之间，成纱质量优于黄麻而次于亚麻。同时，菠萝叶纤维还具有天然的抗菌性能、优良的吸湿散热性能，其独特的中空多孔结构使其透气、吸湿，被称为“会呼吸的纤维”，在纺织领域展现出巨大的应用潜力，可用于生产牛仔布、高级礼服面料、装饰织物、家具布、针织女外衣、袜子等。在医疗领域，其抗菌性能使其有望成为伤口敷料、手术缝合线等产品的理想材料；在工业中，可用于生产针刺非织造布、橡胶运输带的帘子布、三角带芯线、帆布等，还可用于造纸、强力塑料、屋顶材料、绳索、渔网及编织工艺品等。因此，对菠萝叶纤维的开发利用具有重要的经济和环保意义。

在菠萝叶纤维的加工过程中，脱胶是关键环节。传统的化学脱胶方法虽然脱胶效果较好，但存在诸多弊端。化学脱胶需要使用大量的化学试剂，如氢氧化钠、硫酸等，这些试剂不仅对设备具有强腐蚀性，缩短设备使用寿命，增加设备维护成本；而且在脱胶过程中会产生大量含有化学物质的废水，若未经有效处理直接排放，会对水体、土壤等环境造成严重污染，破坏生态平衡；同时，化学脱胶过程条件较为剧烈，容易对纤维本身造成损伤，影响纤维的强度、柔韧性等性能，降低纤维的品质和可纺性。随着人们环保意识的增强和对可持续发展的追求，开发绿色、高效的脱胶方法成为菠萝叶纤维加工领域的研究热点。

酶法脱胶作为一种绿色环保的脱胶方法，具有反应条件温和、对纤维损伤小、污染小等优点，逐渐受到关注。酶具有高度的专一性，能够特异性地作用于菠萝叶纤维中的胶质成分，在温和的条件下将其分解去除，从而最大程度地保留纤维的天然特性，提高纤维的品质和可纺性。然而，天然酶的活性和稳定性往往难以满足工业化生产的需求，且成本较高，限制了酶法脱胶的大规模应用。

毕赤酵母表达系统作为一种重要的真核表达系统，在蛋白表达领域具有显著优势。首先，毕赤酵母含有目前启动能力最强且调控机理最严格的启动子之一——醇氧化酶基因AOX1启动子，在甲醇的诱导下，该启动子能够驱动外源基因实现高水平表达，可使外源蛋白的表达量可达细胞总蛋白的30%。其次，毕赤酵母具有真核细胞翻译后修饰的功能，如糖基化、磷酸化、乙酰化等。经过修饰后的蛋白更接近天然蛋白的结构和功能，具有更高的生物活性，这对于一些需要保持特定活性的酶类表达至关重要。再者，毕赤酵母发酵工艺成熟，具有强烈的好氧生长偏爱性，可进行细胞高密度培养，适合大规模工业化生产，能够满足工业上对酶制剂大量需求；并且其培养基成本低廉，培养条件简单，生长繁殖速度快，可有效降低生产成本。此外，外源基因一般以单拷贝或者多拷贝的形式在特定的位点整合进酵母染色体上，伴随着染色体的复制而复制，遗传稳定性较高，有利于稳定地生产目标蛋白。

基于以上背景，本研究旨在构建能够高效表达菠萝叶纤维脱胶酶的毕赤酵母工程菌。通过基因工程技术，将编码脱胶酶的基因导入毕赤酵母中，利用毕赤酵母表达系统的优势，实现脱胶酶的高效表达。对表达的脱胶酶进行分离、纯化和性质研究，明确其酶学特性。将该脱胶酶应用于菠萝叶纤维的脱胶工艺中，探究其脱胶效果，以期为菠萝叶纤维的绿色、高效脱胶提供新的技术手段和理论依据，推动菠萝叶纤维资源的开发利用。

1.2国内外研究现状

在菠萝叶纤维脱胶研究方面，国内外已取得一定进展。传统的化学脱胶法，如使用氢氧化钠、硫酸等化学试剂进行煮练、酸处理等步骤，虽能有效去除胶质，但对环境和纤维损伤大。有研究采用改进的化学脱胶工艺，通过调整试剂浓度和处理时间，在一定程度上降低了对纤维的损伤，但仍未解决环境污染问题。生物脱胶法是利用微生物或酶对菠萝叶纤维进行脱胶。有研究筛选出能高效降解菠萝叶纤维胶质的芽孢杆菌，将其用于菠萝叶纤维脱胶，结果表明该方法能有效去除部分胶质，且对纤维损伤较小，但脱胶周期较长。在酶法脱胶中，有学者使用复合酶对菠萝叶纤维进行脱胶，发现果胶酶、纤维素酶和半纤维素酶的协同作用可显著提高脱胶效果，纤维的拉伸强度和白度有所提升，但其酶的活性和稳定性限制了大规模应用。

毕赤酵母工程菌的构建与应用在多个领域取得显著成果。在医药领域，有研究成功构建了表达人胰岛素的毕赤酵母工程菌，通过优化表达条件，实现了胰岛素的高效表达，且表达的胰岛素具有正确的折叠和生物活性。在工业酶生产方面，构建的表