玉米大斑病菌效应因子StSse19基因的克隆、表达模式分析及在原核系统中的表达.pdfVIP

第47卷第3期河北农业大学学报Vol.47No.3

2024年5月JOURNALOFHEBEIAGRICULTURALUNIVERSITYMay.2024

文章编号：1000-1573(2024)03-0066-06DOI：10.13320/ki.jauh.2024.0040

玉米大斑病菌效应因子StSse19基因的克隆、表达

模式分析及在原核系统中的表达

杨俊芳，尹贵波，周启慧，刘玉卫，巩校东，谷守芹111111,2

（1.河北农业大学生命科学学院/华北作物改良与调控国家重点实验室/河北省农业微生物生物信息利用技

术创新中心，河北保定071000；2.河北省湿地保护与绿色发展协同创新中心，河北衡水053010）

摘要：玉米大斑病是由玉米大斑病菌引起的玉米叶部真菌性病害。本课题组前期通过对病菌侵染玉米的转录组

StSse19-

分析发现，效应因子为重要的致病因子，但对其结构及功能尚不清晰。本研究以野生型菌株0123的

StSse19-

cDNA为模版，克隆并对其结构进行生物信息学预测；结合对病菌侵染玉米的RNASeq数据分析明确

-StSse19-StSse19

该基因的表达模式，进而利用qRTPCR技术证实其表达模式；构建的融合表达载体pET28a，

-

在大肠杆菌BL21（DE3）中以IPTG诱导表达该目的基因，通过SDSPAGE技术检测其表达情况。结果表明，

StSse19的CDS序列由330个核苷酸组成，编码109个氨基酸残基，序列比对发现该蛋白无同源蛋白，表明

其为大斑病菌的特异效应蛋白；对StSse19的表达模式分析发现，该基因在侵染玉米24h的表达量显著提高，

StSse19-

72h表达量下降，推测该基因参与病菌的侵染过程；将在原核系统中进行表达，SDSPAGE分析结果显示，

该蛋白大小为28kD，用Ni柱层析法结合Westernblot检测显示获得了纯化的目的蛋白。该研究明确了StSse19

基因的结构特征及表达模式、获得了StSse19在原核体系中的表达蛋白，为深入揭示其功能及作用机制奠定了

基础。

关 键 词：玉米大斑病菌；效应因子；StSse19；原核表达；qRT-PCR

中图分类号：S435.131.4开放科学（资源服务）标识码 OSID：

文献标志码：A

Cloning,prokaryoticexpressionandexpressionanalysisofStSse19

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