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硕士蛋白质组学課程考试题

简答题(每小题1０分)

1、自由流电泳分离蛋白质的机理及其优缺陷。

自由流电泳(ＣFFＥ)是在无固相支持介质的薄的矩形分离中,以缓冲液为分离介质进行生物大分子或不溶性颗粒及细胞等物质的分离纯化技术。在CFＦE中,分离介质在两块平行的矩形板构成的分离腔内形成层流（两板之间的距离通常介于0.5—３.0mｍ)分离腔的两侧为正负电极室.被分离物质由一口径很小的输入口进入分离介质中,形成一细带,在垂直于液流的方向上加上均匀的电场后，样品中各种组分因为各自电泳迁移率的差异而各自向与所带电荷符号相反的电极以不一样的速度迁移，相同电泳迁移率的物质则迁移为一窄带，在到达分离腔出口处由分级手机器收集。

优点：CFFＥ是一个连续的而不是分批进行的分离过程.同时因为它不使用有机溶剂、高盐溶液,及硅胶或凝胶等支持介质,分离调整相当温和,对有活性的生物材料的分离纯化提供了十分适宜的分离环境.

缺陷:因自由流电泳是完全无载体的液相电泳，所以除了电泳自身所固有的影响因素外（如:焦耳热，电动力学变形），还有层流(流体力学变形)以及某些综合因素的影响(电流体力学变形等），且这些过程经常相互关联，使整个过程变得极其复杂。重力对自由流电泳会产生影响.颗粒沉降、小滴沉降和热对流是影响自由流电泳的三种重力现象,在微重力条件下这些现象几乎消失,这使CFFE的放大在空间有可能得到实现。

2、质谱仪的构成及其重要技术指标。

质谱仪通常由进样装置、离子化原、质量分析器、离子检测器、数据分析系统构成.其中,离子化原用来待分析的分子转化成气态离子。在质量分析器中,不一样荷质比ｍ/z离子在一个随时间变化的电场作用下分离。离子检测器用来接受在质量分析器中分离的带有不一样荷质比的离子检测m/z值以及不一样m/z的离子密度。

重要技术指标包含:灵敏度，辨别率,准确度，稳定性,质量范围,动态范围

3、蛋白质组学定量分析方法的重要原理。

蛋白质组学定量分析重要包含两种方法:

１、建立在2-DE基础上的电泳方法:其原理是经过比较经过比较蛋白质在不一样胶上的染色强度来进行相对定量。提供蛋白质体现水平的信息。

2、运用质谱检测技术:对来自不一样品的肽段标上一个内部原则,使得可以识别不一样品起源的肽段，以质谱峰的信号强度就可以作为定量的依据。

4、请列举预测蛋白质相互作用的方法。

1、酵母双杂交法：重要原理是将可能存在相互作用的蛋白之一与Gａl4的DB结构域融合。此外一个与Ｇal４的AD结构域的酸性区域融合。假如在两个待测蛋白之间存在相互作用,那么分别位于这两个融合蛋白上的DB和AD就能重新形成有活性的转录激活因子，从而激活相应基因的转录与体现。经过对报道基因体现产物的检测,反过来可判别作为“诱饵和“猎物”的两个蛋白质之间是否存在相互作用.

２、免疫共沉淀法:免疫共沉淀是一个比较经典的蛋白质相互作用方法,其实验比较简朴。裂解细胞后,加入抗体,抗原被沉淀下来后洗涤,去除非特异性亲和再分析结合复合体。现在常使用Pull-dｏｗn实验结合免疫共沉淀可以对可能的蛋白质相互作用进行验证．

3、高通量质谱蛋白质鉴定：使用一分子标签如FLAG标记把蛋白,使融合蛋白在细胞内过体现。经过免疫亲和（ＦLＡＧ抗体)捕捉到抽提物中把蛋白形成的蛋白质复合物。SDＳ分离复合体各组分，胰酶酶切后,进行质谱分析。此法适合于分析天然状态下细胞内浓度较低的蛋白质,但是假如蛋白质浓度过高则背景较强,产生假阳性。

4、串联亲和纯化（tandemａffinitｙｐuｒiｆiｃatｉon，TAP）:该技术关键是设计一个双重分子标签,包含A蛋白(ＩgＧbｉnｄingprotein)、TＥV蛋白酶切位点、钙调素结合蛋白.将TAP标签构建到靶蛋白上,然后在宿主细胞内体现融合蛋白,体现水平接近把蛋白的天然状态．可以与把蛋白相互作用的其余蛋白质结合到融合蛋白上，形成复合体。细胞裂解物和IｇＧ基质温浴在一起，经过A蛋白复合物结合在IｇG上.冲洗后,加入ＴEＶ蛋白酶，洗脱复合物。在Cａ2+存在的情况下，洗脱液与包被钙调素的温育在一起，复合物就结合在珠子上。进一步洗去杂质后,加入EＧTA鳌合，复合物脱落。ＳDS-PAＧE分离复合体各组分,胰酶切割后进行质谱分析。该方法检测到的蛋白质相互作用更加接近自然条件下蛋白质的性质,包含浓度，定位和翻译后修饰。适合于检测大量蛋白质之间的相互作用而形成的复合物,而不局限在两个蛋白质之间相互作用。但是不能检测蛋白质复合物形成的顺序。需要与酵母双杂交等方法互补。

5、系统生物学研究的重要流程是什么？

1。对前人的实验进行总结,取得大量关于系统的信息,在已有的大量数据（如:基因组，蛋白质组，转录组,代谢组等数据）的基础上,对选定的某一生物系统的全部组分进行了解和拟定,描绘出该系统的