高效液相色谱法新.pptVIP

（优(You)选）高效液相色谱法新第一页，共四十五页。

13.1HPLC概(Gai)述1.基本概念与特点2.HPLC与经典LC的比较3.HPLC仪器结构第二页，共四十五页。

13.1HPLC概(Gai)述概念：高效液相色谱法是在20世纪60年代末，以经典液相色谱为基础，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高效固定相、高压输液泵和高灵敏度在线检测器，从而发展起来的一种新型分离分析技术。特点：适范围广、分离性能好、分析速度快、流动相可选择范围宽、灵敏度高、操作自动化等。1.基本概念与特点2.HPLC与经典LC的比较3.HPLC仪器结构第三页，共四十五页。

13.1HPLC概(Gai)述HPLC与经典LC的比较一览表经典液相色谱高效液相色谱常压或减压高压，40～50MPa填料颗粒大填料颗粒小，2～50μm柱效低柱效高,40000～60000块/m分析速度慢分析速度快色谱柱只用一次色谱柱可重复多次使用不能在线检测能在线检测1.基本概念与特点2.HPLC与经典LC的比较3.HPLC仪器结构第四页，共四十五页。

13.1HPLC概(Gai)述HPLC仪器结构示意图1.基本概念与特点2.HPLC与经典LC的比较3.HPLC仪器结构第五页，共四十五页。

13.2HPLC分(Fen)类与基本原理化合物的极性、电荷、分子大小、旋光性四种主要性质，化合物这些性质的差异是引起高效液相色谱分离本质性原因，对应着分配色谱、离子交换色谱、空间排阻色谱、手性色谱等分离方法。1.方法分类2.基本原理第六页，共四十五页。

13.2方法分类与(Yu)基本原理HPLC与GC在基本原理、概念和方法基本上相同，主要差别是流动相的性质不同。因此，某些公式的表现形式或参数的含意有些差别。(1)HPLC中的vanDeemter方程表现形式：H=A+Cu1.方法分类2.基本原理第七页，共四十五页。

13.2HPLC分(Fen)类与基本原理3145uHPLCGCH2图10-2流动相的流速对GC与HPLC柱效影响对比(2)HPLC中涡流扩散和传质阻力对柱效的影响1.方法分类2.基本原理第八页，共四十五页。

13.2HPLC分类(Lei)与基本原理(3)HPLC分离条件选择①采用小颗粒、窄粒度分布的球形固定相、首选化学键合相，匀浆法装柱；②采用低黏度流动相、低流速(1mL/min)；③柱温保持在25-30℃为宜。1.方法分类2.基本原理第九页，共四十五页。

13.3各类高效液相色(Se)谱法13.3.1液-固吸附色谱法13.3.2液-液分配色谱法13.3.3化学键合色谱法13.3.4其他色谱法第十页，共四十五页。

13.3各类高(Gao)效液相色谱法

13.3.1液-固吸附色谱法分离机理吸附色谱法是被分离的组分分子与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心，靠组分分子的吸附系数的差异而分离。在吸附色谱中，选择使用条件使组分间的分配系数K产生差别，以达到分离的目的。由于表面积S不易测，而k=KS/Vm，因此常用k代替K来填料问题。第十一页，共四十五页。

13.3各类(Lei)高效液相色谱法

13.3.1液-固吸附色谱法影响容量因子的因素以硅胶吸附剂为例(1)硅胶的活性硅胶必须保持干燥，遇水会失活，烘干可再生。使用硅胶柱进行色谱分离时，必须使用不含水的流动相。硅胶活性越大，k越大，tR越长。(2)溶剂的极性与硅胶吸附剂配套的流动相，是以烷烃为底剂加适当极性调整剂，组成二元或多元溶剂系统。溶剂的极性越大，k越小，tR越短。(3)容量因子序组分的极性越大，在硅胶吸附剂表面的保留作用(亲和力)就越强，k越大，tR越长。第十二页，共四十五页。

13.3各类高效液(Ye)相色谱法

13.3.2液-液分配色谱法分离机理：分配色谱法是由于样品组分溶入固定相与流动相达到“平衡”后分配系数的差别而分离。不同组分在固定相与流动相中的溶解度差别越大(K、k差别也大)分离效果越好。正相液-液色谱法：极性：流动相＜固定相。极性小的组分先出峰、极性大的组分后出峰。反相液-液色谱法：极性：流动相＞固定相。极性大的组分先出峰、极性小的组分后出峰。第十三页，共四十五页。

13.3各类高效(Xiao)液相色谱法

13.3.3化学键合相色谱法将固定液的官能团键合在载体的表面就构成了化学键合相，以此为固定相的色谱法称为化学键合相色谱法(bondedphasechromatography，BPC)。化学键合相既有分配作用，又有吸附作用，应用广泛硅胶内部十八烷基硅烷键合相ODS硅胶表面硅胶内部第十四页，共四十五页。

13.3各类高(Gao)效液相色谱法

13.3.3化