双向电泳原理及实验步骤.pptxVIP

蛋白质组双向电泳实验操作

1994年，澳大利亚Macquarie大学的Wilkins和Williams首先提出了蛋白质组（Proteome）的概念，其定义为在一种细胞内存在的全部蛋白质。蛋白质组研究中主要应用的技术包括：双相电泳(2-DE)、新型质谱(MS)技术、数据库设置与检索系统等。

将来自于全细胞、组织或生物体中所包含的多达几千种混合蛋白质进行分离、检测和分析。12-DE技术依然是大多数蛋白质组研究中分离复杂蛋白质混合物的首选技术。2蛋白质组分析的首要要求

蛋白样品的IEF和PAGE电泳分离图像扫描和初步分析感兴趣蛋白点的切取新蛋白质的发现其它实验的进一步验证蛋白信息的初步获得质谱结果的生物信息学分析和比对生物学问题的提出01质谱的多肽指纹图、微测序分析实验模型的设计02胰酶对脱色后蛋白质的消化实验组和对照组样品的制备03

蛋白质样品的制备双向电泳图像分析转印至膜上的蛋白凝胶中的蛋白溶液中的蛋白混合肽蛋白质质量N端测序肽序列质谱数据肽指纹图数据搜索新的或已知蛋白蛋白转录后修饰的鉴定蛋白质组研究的基本技术路线

一、双向电泳的实验原理

第一向：等电聚焦+–pH3pH7.5pH10+–pH3pH7.5pH10+–pH3pH7.5pH10+–pH3pH7.5pH10

一维固相pH梯度等电聚焦

（IEFwithIPG）：IPG胶的材料是Immobili