副猪嗜血杆菌的分离鉴定、MLST分型及aroA基因自杀性质粒构建研究.docxVIP

副猪嗜血杆菌的分离鉴定、MLST分型及aroA基因自杀性质粒构建研究

一、引言

1.1研究背景

副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis，Hps）是一种对全球养猪业造成严重危害的细菌，它能够引起猪的多发性浆膜炎、肺炎、关节炎和脑膜脑炎等疾病，这些病症合称为格拉泽氏病（Glassersdisease）。这种细菌主要感染2周龄至4月龄的猪只，尤其是断奶前后和保育期的仔猪，发病率一般为20%-30%，严重时死亡率可达50%以上。

副猪嗜血杆菌病的临床症状较为复杂，这也给诊断和治疗带来了很大的困难。急性病例往往首先发生于膘情良好的猪，病猪发热体温在40.5-42.0℃，精神沉郁，食欲下降，呼吸困难，腹式呼吸，眼睑水肿，眼圈青紫色，皮肤发红或苍白，耳梢发紫，皮肤及黏膜发绀。关节（腕关节、跗关节等）肿胀、跛行，行走缓慢或不愿站立，站立时困难甚至瘫痪，共济失调，临死前侧卧或四肢呈划水样，有时会无明显症状突然死亡。慢性病例多见于保育猪，主要症状是食欲下降、咳嗽、呼吸困难、被毛粗乱、四肢无力或跛行、生长不良，直至衰竭而死亡，母猪发病可造成流产。

副猪嗜血杆菌具有多种血清型，目前已知的有15种以上，且不同血清型之间的交叉保护力较弱，这使得防控工作变得更为复杂。同时，该病菌的传播途径多样，包括飞沫传播、接触传播以及通过污染的饲料、饮水和器具传播等，使得疫情的防控难度加大。而且，副猪嗜血杆菌容易产生耐药性，使得治疗效果不佳，这就要求养殖户在用药时需要更加谨慎和科学。

副猪嗜血杆菌病的爆发会给养殖场带来巨大的经济损失。除了猪只的死亡和生长迟缓带来的直接损失外，治疗疾病所需的药物费用、兽医服务费用以及因疫情防控而增加的消毒、隔离等措施的成本也不容忽视。此外，疫情的发生可能导致养殖场的声誉受损，影响猪肉产品的销售，进一步加剧经济损失。

1.2研究目的与意义

本研究旨在对副猪嗜血杆菌进行分离鉴定，确定其种类和特性，为后续研究提供基础。通过对分离出的副猪嗜血杆菌进行MLST分型，了解其分子流行病学特征和遗传多样性，掌握不同地区、不同猪场的菌株分布规律，有助于追踪传染源和传播途径，为制定针对性的防控措施提供科学依据。构建aroA基因自杀性质粒，为深入研究副猪嗜血杆菌的基因功能、致病机制以及开发新型疫苗和诊断方法奠定基础。

副猪嗜血杆菌病给养猪业带来了巨大的经济损失，严重威胁着养猪业的健康发展。本研究对于有效防控副猪嗜血杆菌病具有重要意义，通过准确的分离鉴定和MLST分型，可以及时发现疫情，采取有效的防控措施，减少疾病的传播和扩散，降低养猪业的经济损失。深入研究aroA基因自杀性质粒，有助于揭示副猪嗜血杆菌的致病机制，为开发新型疫苗和治疗方法提供理论支持，提高猪群的健康水平，促进养猪业的可持续发展。

1.3国内外研究现状

在国外，副猪嗜血杆菌的研究起步较早，对其病原学、流行病学、致病机制、诊断方法和防控措施等方面都有较为深入的研究。在分离鉴定方面，已经建立了多种传统的细菌分离培养和生化鉴定方法，同时，分子生物学技术如PCR、实时荧光定量PCR、核酸杂交等也被广泛应用于副猪嗜血杆菌的快速准确鉴定。在MLST分型方面，国外已经建立了较为完善的MLST数据库，对不同地区、不同宿主来源的副猪嗜血杆菌进行了大量的分型研究，揭示了其分子流行病学特征和遗传进化关系。在aroA基因相关研究方面，国外学者对aroA基因的功能、表达调控以及在细菌致病过程中的作用进行了深入研究，为构建aroA基因自杀性质粒和开发新型疫苗提供了理论基础。

在国内，随着养猪业的规模化和集约化发展，副猪嗜血杆菌病的发生日益频繁，对其研究也逐渐受到重视。国内学者在副猪嗜血杆菌的分离鉴定、MLST分型和aroA基因相关研究等方面取得了一定的进展。在分离鉴定方面，国内也建立了一系列的传统和分子生物学鉴定方法，并且对不同地区的副猪嗜血杆菌进行了分离鉴定和流行病学调查。在MLST分型方面，国内也开展了一些相关研究，对部分地区的副猪嗜血杆菌进行了MLST分型，初步了解了其分子流行病学特征。在aroA基因相关研究方面，国内也有学者对aroA基因进行了克隆、表达和功能分析，为构建aroA基因自杀性质粒提供了技术支持。

然而，目前国内外的研究仍存在一些空白和不足。在分离鉴定方面，传统方法操作繁琐、耗时长，且容易受到其他细菌的干扰，分子生物学方法虽然快速准确，但成本较高，对实验条件要求也较高，需要进一步开发更加简便、快速、准确且低成本的鉴定方法。在MLST分型方面，虽然已经建立了一些数据库，但不同地区的菌株数据还不够完善，需要进一步扩大样本量，深入研究不同地区、不同宿主来源的菌株之间的遗传关系和进化规律。在aro