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shRNA管理师中级考试试卷与答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）

1.shRNA构建载体常用的工具酶是（）

A.淀粉酶B.限制性内切酶C.蛋白酶D.脂肪酶

2.以下哪种细胞适合进行shRNA转染实验（）

A.红细胞B.神经元细胞C.血小板D.表皮细胞

3.shRNA发挥作用的主要机制是（）

A.降解DNAB.促进转录C.抑制翻译D.激活蛋白活性

4.进行shRNA实验时，阴性对照的作用是（）

A.验证实验可靠性B.增强shRNA效果C.抑制非特异性作用D.提高细胞活性

5.设计shRNA序列时，一般长度为（）

A.10-15bpB.19-25bpC.30-40bpD.50-60bp

6.转染shRNA进入细胞的方法不包括（）

A.脂质体转染B.电穿孔转染C.病毒载体转染D.过滤法

7.shRNA作用的对象是（）

A.DNAB.mRNAC.tRNAD.rRNA

8.保存shRNA样本的合适温度是（）

A.4℃B.-20℃C.-80℃D.37℃

9.检测shRNA干扰效果常用的技术是（）

A.WesternblotB.凝胶过滤C.离子交换色谱D.纸层析

10.以下哪个软件可用于shRNA设计（）

A.PhotoshopB.PremiereC.BLASTD.SnapGene

二、多项选择题（每题2分，共10题）

1.以下属于shRNA实验中可能用到的试剂有（）

A.转染试剂B.细胞培养液C.抗生素D.缓冲液

2.影响shRNA干扰效率的因素包括（）

A.序列设计B.转染方法C.细胞类型D.培养条件

3.病毒载体用于shRNA传递的优点有（）

A.转染效率高B.可感染多种细胞C.安全性高D.易于操作

4.shRNA可以应用于（）

A.基因功能研究B.疾病治疗C.药物研发D.细胞分化调控

5.在构建shRNA表达载体时，需要考虑的因素有（）

A.启动子B.终止子C.抗性基因D.多克隆位点

6.对shRNA实验结果进行分析时，可从哪些方面入手（）

A.基因表达水平B.蛋白表达水平C.细胞表型变化D.酶活性变化

7.以下哪些操作有助于提高shRNA实验的重复性（）

A.标准化实验流程B.使用同一批次试剂C.固定实验人员D.定期校准仪器

8.选择细胞进行shRNA实验时，需要考虑的因素有（）

A.细胞的生长特性B.细胞的来源C.细胞的转染效率D.细胞的遗传背景

9.shRNA与miRNA的区别在于（）

A.作用机制B.结构特点C.来源D.应用范围

10.进行shRNA实验前，细胞准备工作包括（）

A.细胞复苏B.细胞传代C.细胞计数D.细胞鉴定

三、判断题（每题2分，共10题）

1.shRNA可以直接作用于DNA来调控基因表达。（）

2.转染效率越高，shRNA的干扰效果一定越好。（）

3.设计shRNA序列时不需要考虑基因的其他结构。（）

4.所有细胞都适合进行shRNA转染实验。（）

5.阴性对照在shRNA实验中可有可无。（）

6.shRNA实验过程中不需要无菌操作。（）

7.保存shRNA样本时，温度越低越好。（）

8.只要shRNA序列设计正确，实验就一定会成功。（）

9.检测shRNA干扰效果只能通过检测蛋白表达水平。（）

10.病毒载体转染shRNA比脂质体转染更安全。（）

四、简答题（每题5分，共4题）

1.简述shRNA的作用原理。

shRNA进入细胞后，被加工成siRNA，与相关蛋白形成RNA诱导沉默复合体（RISC）。RISC中的siRNA识别并结合互补的靶mRNA，核酸酶将mRNA降解，从而实现对特定基因表达的抑制。

2.设计shRNA序列时需要注意哪些要点？

需注意避免与其他基因有同源性，防止脱靶；选择合适的GC含量，一般在40%-60%；避免序列中出现连续的多个相同碱基；要结合靶基因的结构，选择合适区域设计，提高干扰效率。

3.列举三种检测shRNA干扰效果的方法及原理。

-Westernblot：通过抗体与抗原特异性结合，检测蛋白表达量变化判断干扰效果。

-qRT-PCR：定量检测mRNA水平，根据mRNA量变化评估干扰情况。

-细胞表型观察：观察细胞生长、形态等变化间接反映shRNA对基因功能影响。

4.简述转染shRNA进入细胞的脂质体转染法的操作步骤。

先将shRNA与脂质体分别稀释在缓冲液中，然后混合均匀，室温孵育一段时间形成脂质体-shRNA复合物。将复合物加入到含有细胞的培养液中，继续培养细胞，使shRNA进入细胞发挥作用。

五、讨论题（每题5分，共4题）

1.在shRNA实验中，如何提高实验的准确性和可靠性？

要严格控制实验条件，包括细胞培养条件稳定，试剂质量可靠且批次一致；规范实验操作，如转染过程按标准流程；设置多种对照，如阴性、阳性对照；重复实验获取多组数据进行统计学分析，减少误差和偶然