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shRNA管理师高级考试试卷与答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）

1.shRNA干扰基因表达主要作用于（）

A.转录水平B.转录后水平C.翻译水平D.翻译后水平

2.构建shRNA载体常用的工具酶是（）

A.限制性内切酶B.淀粉酶C.脂肪酶D.蛋白酶

3.以下哪种细胞适合用于shRNA转染实验（）

A.红细胞B.神经细胞C.大肠杆菌D.植物细胞

4.shRNA设计时，其序列长度一般为（）

A.10-15bpB.19-25bpC.30-40bpD.50-60bp

5.转染shRNA时，常用的转染试剂是（）

A.青霉素B.链霉素C.LipofectamineD.葡萄糖

6.检测shRNA干扰效果最常用的技术是（）

A.凝胶成像B.WesternblotC.比色法D.沉淀法

7.为保证shRNA实验的准确性，通常需要设置（）

A.空白对照B.阳性对照C.阴性对照D.以上都需要

8.shRNA表达载体构建后需要进行（）

A.测序验证B.离心处理C.加热处理D.过滤处理

9.储存shRNA溶液的合适温度是（）

A.4℃B.-20℃C.-80℃D.37℃

10.shRNA可以特异性沉默的是（）

A.DNAB.RNAC.蛋白质D.多糖

二、多项选择题（每题2分，共10题）

1.设计shRNA序列时需要考虑的因素有（）

A.GC含量B.避免与其他基因同源C.序列长度D.密码子偏好性

2.以下哪些方法可用于shRNA的导入（）

A.电穿孔法B.脂质体转染法C.病毒载体介导法D.显微注射法

3.shRNA实验中可能遇到的问题有（）

A.干扰效果不佳B.细胞毒性C.脱靶效应D.载体构建失败

4.用于shRNA实验的细胞培养条件包括（）

A.合适的培养基B.适宜的温度C.一定的气体环境D.定期换液

5.检测shRNA干扰效果的指标有（）

A.mRNA水平变化B.蛋白质表达量变化C.细胞表型改变D.细胞增殖速率

6.构建shRNA表达载体的基本步骤有（）

A.设计引物B.扩增目的片段C.载体酶切D.连接转化

7.以下哪些属于shRNA的应用领域（）

A.基因功能研究B.疾病治疗C.药物研发D.作物育种

8.保存shRNA相关样品时需要注意（）

A.避免反复冻融B.标记清晰C.低温保存D.防止污染

9.评估shRNA转染效率的方法有（）

A.荧光定量PCRB.流式细胞术C.显微镜观察D.蛋白质测序

10.在shRNA实验中，对实验数据处理包括（）

A.统计分析B.绘制图表C.数据记录D.结果验证

三、判断题（每题2分，共10题）

1.shRNA可以直接作用于DNA序列。（）

2.构建shRNA载体时，不需要考虑载体的抗性基因。（）

3.所有细胞都适合进行shRNA转染实验。（）

4.shRNA干扰效果只与序列有关，与转染效率无关。（）

5.转染shRNA后，细胞的生长状态不会受到影响。（）

6.检测shRNA干扰效果只能通过检测蛋白质水平。（）

7.shRNA表达载体构建成功后无需验证。（）

8.储存shRNA溶液时，温度越高越好。（）

9.shRNA可特异性沉默多个基因。（）

10.在shRNA实验中，设置对照实验并非必要。（）

四、简答题（每题5分，共4题）

1.简述shRNA干扰基因表达的原理。

答案：shRNA进入细胞后，被Dicer酶切割成siRNA，siRNA与AGO蛋白等形成RNA诱导沉默复合体（RISC），RISC中的siRNA识别并结合靶mRNA，在核酸酶作用下将其降解，从而在转录后水平干扰基因表达。

2.列举三种提高shRNA转染效率的方法。

答案：一是优化转染试剂与核酸的比例，找到最佳配比；二是对细胞进行预处理，如提前培养至合适密度，增强细胞活性；三是选择合适的转染方法，不同细胞系对不同转染方法敏感性不同，可摸索适宜方法。

3.简述shRNA实验中设置对照的意义。

答案：设置对照可用于评估实验结果的可靠性。空白对照了解细胞自然状态；阳性对照验证实验体系有效性；阴性对照排除非特异性干扰，确保观察到的现象是由shRNA特异性作用导致，提高实验准确性和可信度。

4.简述构建shRNA表达载体的关键要点。

答案：关键要点包括准确设计与靶基因互补的shRNA序列，合理选择载体并确保其具备合适元件；使用合适工具酶进行载体酶切和目的片段连接；连接后筛选阳性克隆并测序验证，保证序列正确，为后续实验奠定基础。

五、讨论题（每题5分，共4题）

1.讨论shRNA在疾病治疗中的潜在应用和面临的挑战。

答案：潜在应用包括针对病毒感染性疾病，沉默病毒相关基因抑制病毒复制；对肿瘤疾病，沉默致癌基因抑制肿瘤生长。面临挑战有：存在脱靶效应，可能影响其他正常基因功能；体内递送效率低，难以有效到达靶细胞；长期安全性未知，可能引发免疫反应等。

2.分析在shRN