转基因技术动植物转基因方法.ppt

引言FOREWORD转基因技术（GeneticallyModified）运用科学手段从某种生物体中提取所需要的基因，将其转入另一种生物中，使与另一种生物的基因进行重组，再从结果中进行数代的人工选育，从而获得特定的具有变异遗传性状的物质。与杂交不同，该技术利用转基因技术可以创造新染色体，改变动植物性状，培育新品种，具有更大的随机性、不确定性。也可以利用其它生物体培育出期望的生物制品，用于医药、食品等方面。当前1页，总共22页。

转基因技术转基因技术的步骤植物转基因方法动物转基因方法转基因技术的应用转基因技术的前沿发展我们身边的合成生物学转基因技术【DAWN_ZX】当前2页，总共22页。

【DAWN_ZX】转基因技术转基因技术的步骤STEP1：目的基因的获取

方法：（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增目的基因（3）人工合成当前3页，总共22页。

【DAWN_ZX】转基因技术转基因技术的步骤STEP2：基因表达载体的构建

目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。

组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因

标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用抗生素基因。【启动子】是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。

【终止子】也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。当前4页，总共22页。

【DAWN_ZX】转基因技术转基因技术的步骤STEP3：将目的基因导入受体细胞

（1）导入植物细胞一般用农杆菌转化法，也可用基因枪法或花粉管通道法。（2）导入动物细胞一般用显微注射法。（3）导入微生物细胞一般用感受态细胞吸收DNA分子的方法。当前5页，总共22页。

【DAWN_ZX】转基因技术转基因技术的步骤STEP4：目的基因的检测和表达

1.检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因。方法：采用DNA分子杂交技术。

2.检测目的基因是否转录出了mRNA。方法：采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。

3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质。方法：从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原－抗体杂交。

4.进行个体生物学水平的鉴定。当前6页，总共22页。

【DAWN_ZX】转基因食品转基因技术的步骤所用工具：分子手术刀——限制性核酸内切酶来源：从原核生物中分离纯化出来。

功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。

结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。当前7页，总共22页。

【DAWN_ZX】转基因技术转基因技术的步骤所用工具：分子缝合针——DNA连接酶

连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。当前8页，总共22页。

【DAWN_ZX】转基因技术转基因技术的步骤所用工具：分子运输车——载体载体具备的条件：

①能在受体细胞中复制并稳定保存。

②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。

③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。

其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。当前9页，总共22页。

【DAWN_ZX】转基因技术植物转基因方法载体介导法农杆菌介导法DNA直接导入法化学物质诱导法电激穿孔法脂质体法显微注射法基因枪法花粉管通道法病毒介导法当前10页，总共22页。

【DAWN_ZX】转基因技术植物转基因方法农杆菌介导法农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中得到了广泛应用。当前11页，总共22页。

【DAWN_ZX】转基因技术植物转基因方法基因枪介导转换法方法：利用火药爆炸或高压气体加速将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物组织和细胞中，然后通过细胞和组织培养技术，再生出植株，选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。优点:不受受体植物范围的限制，而且其载体质粒的构建也相对简单，是目