实验四PCR产物的T载体克隆和转化讲课文档.pptVIP

实验四PCR产物的T载体克隆和转化;重组DNA技术操作步骤;基本原理;主要步骤：

①制备目的基因和选择相关载体

②目的基因和有关载体进行连接

③重组的DNA导入受体细胞

④DNA重组体的筛选和鉴定

⑤DNA重组体的扩增、表达和其他研究;以

质

粒

为

载

体

的

DNA

克

隆

过

程;（三）PCR扩增特定基因;组织或细胞染色体DNA;;mRNA;化学合成法获取目的基因;几种常用克隆载体的比较;;（一）黏性末端;（二）人工接头;;（四）平端连接;5′

3′;四、外源DNA导入宿主细胞——转;外源基因导入宿主细胞后，筛选含有目的基因的阳性克隆并加以扩增。

所用的方法主要有遗传学方法、免疫学方法、核酸杂交法、PCR等。;1.借助载体上的遗传标志进行筛选

(1)利用抗生素抗性标志筛选

(2)利用基因的插入失活/插入表达

特性筛选

(3)利用标志补救筛选

(4)利用噬菌体的包装特性进行筛选;（一）遗传学方法;插入失活筛选带有重组载体的克隆;第23页，共38页。;;α互补筛选（蓝-白筛选）;第26页，共38页。;PCR产物的T载体

克隆和转化;实验目的：

学习T载体的特点和PCR产物的克隆方法。

实验要求：