软骨细胞T型钙离子通道的过表达通过抑制TGFβ通路，加重骨关节炎.pdfVIP

软骨细胞T型钙离子通道的过表达通过抑制TGFβ通路，

加重骨关节炎

摘要

目的：软骨细胞表达各种各样的离子通道和孔蛋白，统称为“软骨细胞通道组”，通

道组蛋白的活性与离子信号传导的波动有关，离子信号传导是软骨细胞对各式机

械刺激产生的反应中最早的细胞事件之一。钙是一种普遍存在的第二信使，在

机械传导中激活多种细胞内信号传导途径中具有重要作用。然而，导致骨关节

炎（OA）细胞外钙内流的不同离子通道的作用仍然不明确。本研究旨在鉴定T

型电压门控Ca2+通道（T-VGCCs，CaV3）是否参与骨关节炎病程，进一步研究

了在机械应力介导下，钙离子内流通过信号依赖方式和非信号依赖方式对软骨

细胞和细胞外基质（ECM）产生的影响。

方法：对12周龄雄性大鼠（每组n=10-12）进行了前交叉韧带横断术

（ACLT）以扰乱关节稳态。番红固绿染色以及HE对膝关节标本进行染色，采

用国际骨关节炎研究学会（OARSI）损伤评分来对染色标本软骨退行性变程度进

行评估，显微CT（microcyte）评价骨赘变化，通过免疫组织化学，蛋白质印迹

实验Westernblot来检测T-VGCC、钙调蛋白、磷酸化钙/钙调蛋白依赖激酶Ⅱ

（pCaMKⅡ）、整合素、激活素受体样激酶1(ALK1)、激活素受体样激酶5

（ALK5）、pSmad2/3、pSmad1/5/9在软骨细胞中的表达以及转化生长因子β1

（TGFβ1）在软骨组织中的表达。治疗组注射T型Ca2+通道拮抗剂TTA-Q6，用

上述方式评估疗效。使用人永生化软骨细胞进行体外实验，综合使用CaV3特异性

激动剂SAK3，钙/钙调蛋白依赖激酶Ⅱ抑制剂KN93，αV-siRNA处理细胞，用六水

合氯化锶代替培养基中氯化钙模拟钙离子内流的非信号依赖方式作用。使用钙离子

探针验证钙离子内流事件发生，细胞免疫荧光对pSmad2/3进行定位，Westernblot

验证CaV3对TGFβ1/pSmad2/3和TGFβ1/pSmad1/5/9的影响，免疫共沉淀证明

pCaMKⅡ和pSmad2/3的结合作用。

结果：ACLT大鼠骨关节炎模型成功建立。组织学层面，OARSI评分显示软骨退

变明显，microCT显示骨赘增加，分子层面，软骨组织中MMP13，ColX,

Aggrecan等标记物升高。OA模型中CaV3的表达显著增加，抑制CaV3通道的开

放可改善软骨退化，包括骨赘的消失，透明软骨层厚度增加以及钙化软骨层的厚

度降低。过表达CaV3引发的钙离子内流通过非信号传导路径激活软骨细胞αV

整合素的激活，并继发细胞外基质TGFβ1激活,另一方面，Ca2+/

calmodulin/CaMKⅡ通路导致软骨细胞的分化和肥大，磷酸化的CaMKⅡ可与保护

软骨的pSmad2/3相结合，降低了pSmad2/3的核积累，TGFβ1/pSmad2/3通路受

到抑制，过度激活的TGFβ1通过pSmad1/5/9加重软骨细胞分化。

结论：本文证实了CaV3蛋白在正常和OA软骨中表达的差异性，解释了其如何

通过调控TGFβ信号通路对软骨细胞和细胞外基质产生影响。Ca2+内流通过信号

传导和非信号传导途径调节TGFβ通路，这部分说明了为什么TGFβ通路在正常

软骨和OA中起着不同的作用。细胞内钙稳态对TGFβ信号转导的正常功能很有

价值,鉴于T-VGCC在OA期间的高表达，它可能成为治疗的潜在靶点。

硕士研究生：唐一杰（运动医学）

指导老师：于腾波（主任医师）

关键字：骨关节炎；T型钙离子通道；整合素αV；钙离子；转化生长因子β

OverexpressionofT-typevoltage-gatedCa2+channels

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