第三章 色谱仪.pptVIP

目前高效液相色谱法已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它的主要缺点。第62页，共97页，星期日，2025年，2月5日三、高效液相色谱仪的主要部件1、高压输液泵由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部件。第63页，共97页，星期日，2025年，2月5日一个好的高压输液泵应符合密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求。常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。恒流泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关；第64页，共97页，星期日，2025年，2月5日恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力而变化，故保留时间的重现性差，它们各有优缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。恒流泵又称机械泵，它又分机械注射泵和机械往复泵两种，应用最多的是机械往复泵。第65页，共97页，星期日，2025年，2月5日A、压力：150～350×105Pa。B、为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。C、应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性第66页，共97页，星期日，2025年，2月5日3、高效液相色谱的梯度洗脱装置当分离分配比相差悬殊的混合物时，用同一种流动相进行洗脱难以实现分离。采用梯度洗脱就很容易解决这一问题。第67页，共97页，星期日，2025年，2月5日泵头比例阀流通池色谱柱混合器进样阀流动相废液阀内梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。第68页，共97页，星期日，2025年，2月5日第30页，共97页，星期日，2025年，2月5日影响FID灵敏度的因素：1）载气和氢气流速：通常以N2为载气，其流速主要考虑其柱效能。但也要考虑其流速与H2流速相匹配。一般N2:H2=1:1~1:1.5；当以He为载气时，则氢气流速=1/3H2+10mL。2）空气流速：流速越大。灵敏度越大，到一定值时，空气流速对灵敏度影响不大。一般地，H2:Air=1:10。第31页，共97页，星期日，2025年，2月5日3）极化电压：在50V以下时，电压越高，灵敏度越高。但在50V以上，则灵敏度增加不明显。通常选择?100~?300V的极化电压。4）操作温度：比柱的最高允许使用温度低约50℃(防止固定液流失及基线漂移)第32页，共97页，星期日，2025年，2月5日FID特点：优点：1）灵敏度高(~10-13g/s)；2）线性范围宽(~107数量级)；3）噪声低；4）耐用且易于使用；5）为质量型检测器，色谱峰高取决于单位时间内引入检测器中组分的质量。在样品量一定时，峰高与载气流速成正比。因此在用峰高定量时，应控制流速恒定！第33页，共97页，星期日，2025年，2月5日缺点：6）对无机物、永久性气体和水基本无响应（不足?），因此FID特别适于水中和大气中痕量有机物分析或受水、N和S的氧化物污染的有机物分析。7）对含羰基、羟基、卤代基和胺基的有机物灵敏度很低或根本无响应。8）样品受到破坏。第34页，共97页，星期日，2025年，2月5日3.电子捕获检测器(ECD)ECD主要对含有较大电负性原子的化合物响应。它特别适合于环境样品中卤代农药和多氯联苯等微量污染物的分析。第35页，共97页，星期日，2025年，2月5日原理及工作过程：从色谱柱流出的载气(N2或Ar)被ECD内腔中的?放射源电离，形成次级离子和电子(此时?电子减速)，在电场作用下，离子和电子发生迁移而形成电流(基流)。当含较大电负性有机物被载气带入ECD内时，将捕获已形成的低速自由电子，生成负离子并与载气正离子复合成中性分子，此时，基流下降形成“倒峰”。第36页，共97页，星期日，2025年，2月5日第37页，共97页，星期日，2025年，2月5日第38页，共97页，星期日，2025年，2月5日ECD特点：1）响应电流i与浓度c是非线性的，即，该式类似于比尔定律。其中，i0为