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(2025年)(完整版)高效液相试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30分）

1.高效液相色谱（HPLC）中，以下哪种因素对反相色谱保留影响最小？

A.流动相pH值

B.固定相碳载量

C.柱温

D.检测器波长

2.某色谱柱的理论塔板数（N）为20000，柱长为150mm，则其理论塔板高度（H）约为：

A.0.0075mm

B.0.075mm

C.0.75mm

D.7.5mm

3.梯度洗脱时，若初始流动相为20%乙腈（水相），最终为80%乙腈，总时间30min，线性梯度下第10min时流动相中乙腈比例为：

A.30%

B.40%

C.50%

D.60%

4.以下检测器中，不属于质量型检测器的是：

A.蒸发光散射检测器（ELSD）

B.示差折光检测器（RID）

C.火焰离子化检测器（FID，需接口）

D.电喷雾离子化质谱检测器（ESI-MS）

5.分析强极性小分子化合物（如氨基酸）时，优先选择的色谱模式是：

A.反相色谱（RPC）

B.正相色谱（NPC）

C.亲水作用色谱（HILIC）

D.离子交换色谱（IEC）

6.色谱峰出现前延（前沿峰）的主要原因可能是：

A.柱超载

B.流动相pH与样品pKa不匹配（酸性样品在低pH流动相）

C.色谱柱污染（柱头塌陷）

D.进样量过大

7.以下关于HPLC泵的描述，错误的是：

A.串联式双柱塞泵的流量精度高于并联式

B.泵的压力波动会影响保留时间重复性

C.梯度洗脱时需使用等度泵

D.泵的最大工作压力与色谱柱填料粒径相关

8.某样品在C18色谱柱上的保留时间（tR）为12min，死时间（t0）为2min，则其容量因子（k）为：

A.4

B.5

C.6

D.7

9.为提高分离度（R），以下操作最有效的是：

A.增加柱长（L）

B.降低流动相流速（u）

C.优化流动相组成（调整k）

D.提高柱温（T）

10.以下哪种固定相适用于分离手性化合物？

A.氰基键合相（CN）

B.环糊精键合相

C.苯基键合相（Ph）

D.二醇基键合相（Diol）

11.流动相过滤的主要目的是：

A.去除溶解氧

B.防止色谱柱堵塞

C.调节pH值

D.提高检测器灵敏度

12.梯度洗脱与等度洗脱相比，优势不包括：

A.缩短复杂样品分析时间

B.改善强保留组分峰形

C.提高弱保留组分分离度

D.减少流动相消耗

13.蒸发光散射检测器（ELSD）的响应与样品的：

A.紫外吸收特性相关

B.分子量大小相关

C.挥发性相关

D.电导率相关

14.色谱柱使用后需用甲醇-水（90:10）冲洗，主要目的是：

A.去除强保留杂质

B.平衡固定相

C.防止微生物生长

D.降低柱压

15.以下哪种情况会导致基线漂移？

A.流动相脱气不彻底

B.柱温箱温度波动

C.进样量过大

D.色谱柱柱效下降

二、填空题（每空1分，共20分）

1.高效液相色谱的核心分离部件是______，其性能主要由______、______和______决定。

2.范第姆特方程（H=A+B/u+Cu）中，A项代表______，B项代表______，C项代表______。

3.反相色谱中，常用的强洗脱溶剂是______和______，弱洗脱溶剂是______。

4.离子对色谱中，常用的离子对试剂对酸性样品为______（如______），对碱性样品为______（如______）。

5.色谱峰的保留时间主要由______和______的相互作用决定，峰宽主要由______和______决定。

6.检测器的灵敏度通常用______表示，线性范围指______与______的比值。

三、简答题（每题6分，共30分）

1.简述反相色谱中流动相pH对酸性化合物保留的影响（以苯甲酸为例，pKa=4.2）。

2.比较C18色谱柱与C8色谱柱的适用场景，并说明原因。

3.梯度洗脱方法开发时，如何确定初始流动相比例和梯度斜率？

4.色谱柱柱压升高的可能原因及解决方法。

5.紫外检测器（UV）与二极管阵列检测器（DAD）的主要区别及各自优势。

四、综合分析题（共20分）

某实验室需建立一种HPLC方法检测人血浆中的某药物（弱碱性，pKa=7.8，分子量320