日本落叶松内源GUS基因鉴定及其酶活性分析.pdfVIP

2024，37（6）：86-92林业科学研究

/lykxyj/ForestResearch

DOI:10.12403/j.1001-1498

日本落叶松内源GUS基因鉴定及其酶

活性分析

11,2211*

叶查龙，张陈谊，杨玲，孙晓梅，李万峰

(1.林木遗传育种全国重点实验室国家林业和草原局林木培育重点实验室中国林业科学研究院林业研究所，北京100091；2.林木遗传育

种全国重点实验室东北林业大学林学院，黑龙江哈尔滨，150040)

摘要：[目的]研究日本落叶松内源β-葡糖苷酸酶（GUS）基因及其酶活性，分析GUS作为报告基因的可靠

性。[方法]利用pCAMBIA1301载体上的GUS基因序列在日本落叶松参考基因组中进行比对，鉴定并克隆

出日本落叶松GUS（LaGUS）基因。在NCBI利用blastp查找其他物种中LaGUS的同源序列并构建进化

树。利用已有的转录组数据和实时荧光定量PCR分析LaGUS基因在日本落叶松中的表达模式。利用组织化

学的方法，以X-gluc作为GUS酶反应底物，检测日本落叶松体细胞胚胎发生过程中内源GUS的酶活性。

[结果]在日本落叶松中鉴定到一个LaGUS基因，CDS长3435bp，编码1144个氨基酸。25种植物中具

有与LaGUS基因相似的序列。LaGUS基因的表达量在活动期高于休眠期，在体胚苗中高于在胚性愈伤组织

和体细胞胚胎中。组织化学染色表明，日本落叶松胚性愈伤组织、体细胞胚胎和体胚苗在室温下染色6d时均

观察到蓝色，但体胚苗的染色程度高于胚性愈伤组织和体细胞胚胎。[结论]日本落叶松具有内源GUS活

性，在基因工程中利用GUS作为报告基因可能存在一定干扰。

关键词：日本落叶松；内源GUS；体细胞胚胎发生；报告基因

中图分类号：S722.3文献标识码：A文章编号：1001-1498(2024)06-0086-07

[5]

β-葡糖苷酸酶（β-glucuronidase，GUS）是L.）叶片发育初期检测到很强的GUS活性。

一种水解酶，可将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸Wozniak等发现甜菜（BetavulgariL.）中具有内

[6]

（X-Gluc）分解，产生蓝色产物，因而被作为报告源GUS活性。Hu等使用多种方法检测了52种

基因广泛使用。自1987年GUS基因被克隆后，植物中的内源GUS活性，发现有些植物的种皮、

[1]

就被广泛应用于转基因研究中。将目的基因或其胚乳，特别是成熟胚中存在GUS活性，这些植物