壳聚糖固定化芦丁降解酶的构建、特性及多元应用探索.docxVIP

壳聚糖固定化芦丁降解酶的构建、特性及多元应用探索

一、引言

1.1研究背景

壳聚糖（Chitosan）作为一种线性多氨基糖，又称脱乙酰甲壳质、聚氨基葡萄糖、可溶性几丁质等，化学名为(1,4)-2-氨基-2-脱氧-B-D-葡聚糖。其来源广泛，是甲壳素部分脱乙酰基的产物，在自然界中，甲壳素是许多低等动物，特别是节肢动物外壳的重要成分，每年地球上甲壳素的自然生成量可达1011t，是年产量仅次于纤维素的第二大天然高分子。壳聚糖无毒、无害、可食用、安全可靠、易于生物降解，不污染环境。它具有独特的分子结构，大分子链上有许多羟基和氨基，以及部分的N-乙酰氨基，这些基团之间会形成多个分子内或分子间的氢键，使壳聚糖具有复杂的双螺旋结构。这种结构赋予了壳聚糖诸多优异特性，如良好的生物相容性、生物活性、抗菌性等，使其在医药、食品、环保、化工等众多领域展现出巨大的应用潜力，例如在医药领域可作为缓控释材料、靶向制剂载体；在食品领域能充当保鲜剂、增稠剂等。

芦丁降解酶是一类能够催化芦丁水解的酶，在植物代谢过程中扮演着重要角色。以苦荞为例，苦荞富含以芦丁为代表的黄酮类物质，具有重要的保健价值，然而在其种子储存和加工过程中，芦丁降解酶会将芦丁转化为苦味的槲皮素，严重影响苦荞制品的风味。研究芦丁降解酶对于解析植物中黄酮类物质的代谢途径，改善植物产品品质具有重要意义。例如，通过对芦丁降解酶的研究，可以找到降低苦荞制品苦味的方法，提高苦荞产品的市场接受度。

固定化酶技术是20世纪60年代发展起来的一种新技术，它通过物理或化学手段将游离酶束缚或限制在特定范围内，使其在保持高效、专一、温和及酶的活性可调节控制等酶催化反应特性以外，还具备分离回收容易、可重复多次使用、操作连续及可控、工艺简便等优势。固定化酶技术在生物及生物工程、医药、食品、医学及生命科学等相关领域得以迅速发展，为酶的大规模应用提供了可能，极大地推动了相关产业的发展。比如在工业生产中，固定化酶可以制成颗粒装成酶柱用于连续生产，降低生产成本，提高生产效率。

1.2研究目的与意义

本研究旨在利用壳聚糖作为载体，对芦丁降解酶进行固定化，通过系统研究固定化过程中的各种条件和参数，优化固定化工艺，制备出具有高酶活性、高稳定性和良好重复使用性的壳聚糖固定化芦丁降解酶。

从理论层面来看，本研究有助于深入理解壳聚糖与芦丁降解酶之间的相互作用机制，丰富固定化酶的理论研究，为进一步拓展固定化酶技术在黄酮类物质代谢调控领域的应用提供理论基础。通过探究固定化过程对芦丁降解酶活性、稳定性等酶学性质的影响，能够揭示固定化技术对酶分子结构和功能的作用规律。

从应用角度而言，成功制备的壳聚糖固定化芦丁降解酶在食品、医药等行业具有广泛的潜在应用价值。在食品行业，可用于控制苦荞等富含芦丁食品在加工和储存过程中的苦味产生，改善食品风味，提高产品品质；在医药行业，芦丁及其降解产物槲皮素具有一定的药用价值，固定化酶可用于相关药物的合成或活性成分的制备，为医药研发提供新的技术手段和工具，推动相关领域的技术创新和产业发展。

1.3国内外研究现状

在壳聚糖固定化酶的研究方面，国内外学者已经取得了众多成果。壳聚糖由于其良好的机械性能、稳定的化学性质、易于接枝改性以及来源丰富、成本低廉、制备简单等优势，已成为开发固定化酶载体材料的重要选择之一。研究涵盖了壳聚糖直接作为固定化酶载体、壳聚糖衍生物作为固定化酶载体以及壳聚糖与其他物质共同作为固定化酶载体等多个方面。例如，有研究将壳聚糖研磨成粉状与粉状胰蛋白酶混合研磨，通过吸附作用固定胰蛋白酶，发现研磨时间越长，固定化效果越好；还有研究将粉末状壳聚糖制备成微球形多孔载体，采用吸附-交联的方法固定化酶，在最佳固定化条件下，酶活力回收率较高。在壳聚糖衍生物作为固定化酶载体的研究中，通过对壳聚糖进行化学修饰，如酰基化、羧基化等反应，生成一系列具有不同性能的衍生物，以满足不同酶固定化的需求。

关于芦丁降解酶的研究，近年来也受到了广泛关注。在苦荞研究中，科研团队通过基因组和转录组挖掘以及分子对接技术，筛选鉴定出多个潜在的芦丁降解酶，并通过多种实验手段证实了部分酶在苦荞种子中水解芦丁产生槲皮素的主导作用。这些研究为解析芦丁降解的生化机制提供了重要依据。

然而，当前研究仍存在一些不足之处。在壳聚糖固定化芦丁降解酶方面，相关研究相对较少，对于固定化条件的优化还不够系统全面，对固定化酶的稳定性、重复使用性等性能的提升还有较大空间。在芦丁降解酶的研究中，虽然已经鉴定出一些关键酶，但对于酶的作用机制以及如何有效调控酶的活性以应用于实际生产等方面，还需要进一步深入探索。

二、壳聚糖固定化芦丁降解酶的制备

2.1材料与方法

本研究中，芦丁降解酶的提取材料选用新鲜的苦荞种