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断奶应激对仔猪肠上皮细胞紧密连接及p38MAPK的作用机制探究

一、引言

1.1研究背景与意义

在现代养猪业中，仔猪断奶是一个关键且具有挑战性的阶段。随着养猪业规模化、集约化程度的不断提高，为了提升母猪的繁殖效率以及防控猪场疫病，早期断奶技术被广泛应用。然而，仔猪在断奶过程中，会面临一系列的应激因素，统称为断奶应激。这是由于环境变化、营养来源改变和心理状态调整等多方面因素引起的生理和心理反应，如从分娩栏转移到保育栏，环境温度、湿度以及喂养方式的改变；从母乳喂养突然转变为食用干饲料，营养摄取途径和种类发生变化；与母猪分离，心理上产生不安和恐惧等。

断奶应激会对仔猪的健康和生长性能产生诸多负面影响。在生理层面，它会导致仔猪消化功能紊乱，消化酶分泌不足，对饲料的消化吸收能力下降，进而出现食欲差、生长迟滞的现象。同时，还会影响仔猪的免疫系统，使免疫力降低，抗病能力减弱，容易受到各种病原菌的侵袭。在行为方面，仔猪表现出狂躁不安、不断叫唤、寻找母猪，随后可能转为安静、呆立无神、喜卧等。严重的断奶应激甚至会导致仔猪死亡，给养猪业带来严重的经济损失。

肠上皮细胞紧密连接是肠上皮屏障的重要组成部分，对维持肠道的正常功能起着关键作用。紧密连接能够维持肠黏膜屏障功能的稳定，调节肠黏膜屏障的通透性，防止细菌内毒素及大分子毒性物质进入肠黏膜。当肠上皮细胞紧密连接受损时，肠黏膜通透性增加，致病菌、内毒素等有害物质就会趁机进入肠道黏膜，激活肠道免疫应答，诱发肠道菌群移位，最终引发一系列肠道疾病，如炎症性肠病、乳糜性腹泻等。而p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路在细胞的应激反应、炎症反应等过程中发挥着重要的调节作用。在应激条件下，p38MAPK信号通路可能被激活，进而影响细胞的功能和代谢。

研究断奶应激对仔猪肠上皮细胞紧密连接和p38MAPK的影响，对于深入了解仔猪断奶应激的机制，提高仔猪的健康水平和生长性能具有重要的理论和实践意义。从理论角度来看，有助于揭示断奶应激影响仔猪肠道健康的分子机制，丰富动物应激生理学和肠道生理学的知识体系。在实践方面，为制定有效的抗应激措施提供科学依据，通过改善饲养管理、添加功能性饲料添加剂等方式，减轻断奶应激对仔猪的负面影响，提高养猪业的经济效益和社会效益，促进养猪业的可持续发展。

1.2研究目的与内容

本研究旨在深入揭示断奶应激对仔猪肠上皮细胞紧密连接和p38MAPK的影响及其潜在机制，为解决仔猪断奶应激问题提供理论支持和实践指导。具体研究内容如下：

断奶应激对仔猪肠上皮细胞紧密连接结构和功能的影响：通过组织学观察和相关指标检测，分析断奶应激前后仔猪肠上皮细胞紧密连接蛋白（如Occludin、Claudin家族、ZO家族等）的表达变化，以及紧密连接结构的形态学改变，探讨断奶应激如何影响肠上皮细胞紧密连接的完整性和通透性。

断奶应激对仔猪p38MAPK信号通路的激活作用：采用蛋白质免疫印迹（WesternBlot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）等技术，检测断奶应激后仔猪肠道组织中p38MAPK的磷酸化水平、相关基因和蛋白的表达变化，明确断奶应激是否激活p38MAPK信号通路以及激活的程度和时间节点。

p38MAPK信号通路在断奶应激影响仔猪肠上皮细胞紧密连接中的作用机制：通过使用p38MAPK特异性抑制剂或激活剂处理仔猪，观察肠上皮细胞紧密连接蛋白表达和结构的变化，研究p38MAPK信号通路在断奶应激与肠上皮细胞紧密连接之间的调控关系，揭示其潜在的分子机制。

1.3研究方法与创新点

本研究采用实验研究法，以“杜×长×大”三元杂交仔猪为实验对象，将仔猪随机分为断奶组和未断奶对照组。断奶组仔猪在特定日龄进行断奶处理，对照组仔猪则继续哺乳。分别在断奶后的不同时间点（如22、24、28、35日龄等）对两组仔猪进行屠宰取样，采集肠道组织样本用于后续检测。

对于肠上皮细胞紧密连接的检测，运用免疫组织化学、免疫荧光等方法观察紧密连接蛋白在肠道组织中的定位和表达情况；采用透射电子显微镜观察肠上皮细胞紧密连接的超微结构变化；通过检测血浆中D-乳酸含量、二胺氧化酶活性等指标来反映肠黏膜通透性的改变。在p38MAPK信号通路的研究中，利用WesternBlot技术检测p38MAPK及其磷酸化形式的蛋白表达水平；通过qRT-PCR技术检测相关基因的mRNA表达量。

本研究的创新点在于全面、深入地研究断奶应激对仔猪肠上皮细胞紧密连接和p38MAPK的影响及其关联机制。以往的研究多侧重于断奶应激对仔猪生长性能、免疫功能等方面的影响，对于肠上皮细胞紧密连接和p38MAPK的研究相对较少，且缺乏系统性和深入性。本研究从分子、