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马铃薯野生种S.commersonii抗寒基因的初定位及标记开发：理论与实践

一、引言

1.1研究背景与意义

马铃薯（SolanumtuberosumL.）作为世界广泛种植的重要块茎类作物，是全球第四大粮食作物，在保障全球粮食安全以及满足未来人口增长对粮食的进一步需求等方面起着重要作用。其不仅营养丰富，含有大量的碳水化合物、蛋白质、维生素和矿物质，还具有高产、适应性强等优点，在159个国家均有种植，全球种植面积达1780万公顷，每年产量约为3.74亿吨。在我国，马铃薯是粮、菜、饲兼用型作物，播种面积稳定在7000万亩左右，产量将近9600万吨，占全世界四分之一左右，稳居世界第一。随着人们生活水平的提高和饮食结构的调整，对马铃薯的需求也在不断增加。

然而，低温冻害是影响马铃薯生产的主要非生物胁迫之一。马铃薯喜凉但不耐冻，对低温非常敏感。当环境温度低于其生长适宜温度时，植株生长缓慢，根系短小，叶片变黄，严重时会导致叶片脱落、干枯，芽也会出现不良发育、早衰等现象。在马铃薯的生长过程中，若遭遇低温冻害，块茎在田间和贮藏期都会遭受冷害和冻害，受冻块茎解冻后组织变色、变软、腐烂，水分蒸发后成为石灰状残渣，韧皮部比周围薄壁细胞对低温更敏感，受冷害的块茎横切面出现网状坏死，随着冷害加重，维管束环周围出现黑褐色斑点，通常脐端附近更严重；叶片在出苗后，-0.8℃时幼苗受冷害，-2℃时受冻害，表现为叶片迅速萎蔫、塌陷，气温变暖时受害部位变成水浸状，死亡后变褐，-3℃时茎叶全部冻死。这些冻害问题极大地影响了马铃薯的生长、发育、产量和品质，严重时甚至导致绝收。

马铃薯野生种S.commersonii具有极强的耐寒性，能够抵御-4.5℃的长时间低温寒潮，为冻害耐受性基因挖掘和耐寒马铃薯育种提供了宝贵的资源。解析S.commersonii的耐寒机制，定位其抗寒基因并开发相关分子标记，对于深入了解马铃薯抗寒的分子机制，通过遗传改良创造具有抗冻性的马铃薯新品种具有重要的育种价值和意义。一方面，挖掘出的抗寒基因可以通过转基因技术导入到马铃薯栽培品种中，提高其抗寒性，使其在寒冷地区得以正常生长，有助于拓展马铃薯的种植区域，增加马铃薯的产量和质量，保障粮食安全；另一方面，利用分子标记辅助育种技术，可以快速筛选出具有优良抗冻性的马铃薯品种，加速育种进程，提高育种效率，降低育种成本。

1.2国内外研究现状

在马铃薯抗寒基因研究方面，国内外学者已取得了一定的进展。早期研究主要集中在马铃薯抗寒生理生化特性方面，发现低温胁迫下马铃薯体内会发生一系列生理生化变化，如细胞膜透性增加、抗氧化酶活性增强、渗透调节物质积累等。随着分子生物学技术的不断发展，研究逐渐深入到基因层面。

国外一些研究团队通过对不同马铃薯品种的转录组分析，鉴定出了多个与抗寒相关的基因，如CBF（C-repeatbindingfactor）转录因子家族基因，这些基因在低温信号传导途径中起着关键作用，能够调控下游一系列抗寒相关基因的表达。同时，利用基因编辑技术（如CRISPR/Cas9）对一些候选抗寒基因进行功能验证，进一步明确了它们在提高马铃薯抗寒性中的作用机制。

国内研究人员也在马铃薯抗寒基因挖掘和功能研究上取得了显著成果。例如，云南师范大学祝光涛团队通过对马铃薯野生种S.commersonii的研究，揭示了响应低温的ScWRKY41通过促进ScF3’H表达和调控类黄酮代谢提高马铃薯耐寒性的分子机制，发现低温诱导ScWRKY41的表达，ScWRKY41招募ScHAC1至ScF3’H启动子区，通过增强ScF3’H启动子区H3K27ac修饰水平和基因的转录，从而调控高程度羟基化的类黄酮的积累，提高马铃薯的耐寒能力；还通过代谢组和转录组关联分析，挖掘出野生马铃薯S.commersonii冻害响应的关键代谢通路和核心基因ScUGT73B4，发现其可特异地响应冻害，并调控类黄酮的积累，通过增强活性氧清除能力来提高马铃薯的抗冻性。

对于S.commersonii的研究，目前虽然在耐寒机制解析方面取得了一定突破，但仍存在一些不足。在抗寒基因的定位方面，尚未精确确定其关键抗寒基因在染色体上的具体位置，这限制了对这些基因的进一步深入研究和利用；在分子标记开发上，已有的标记数量有限且不够精准，无法高效地应用于马铃薯抗寒品种的选育过程中；对于S.commersonii抗寒基因与其他生物学过程之间的相互关系，以及这些基因在不同遗传背景下的表达调控机制，还缺乏全面系统的研究。

1.3研究目标与内容

本研究旨在深入挖掘马铃薯野生种S.commersonii的抗寒基因，通过基因初定位和标记开发，为马铃薯抗寒育种提供理论基