基因工程知识点总结.docVIP

选修３易考知识点背诵

专题１?基因工程

基因工程的概念

基因工程的别名

?基因拼接技术或DNA重组技术

操作环境

?生物体外

操作对象

?基因

操作水平

?ＤNA分子水平

基本过程

?剪切→拼接→导入→体现

成果

?产生人类需要的基因产物

特点

?打破种的界限,定向改造生物

本质

?基因重组

(一)基因工程的基本工具

1.“分子手术刀”－—限制性核酸内切酶(限制酶)

（1)起源:重要是从原核生物中分离纯化出来的。

(２）功效:可以识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，而且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，所以具备特异性。

(3）成果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端.

2。“分子缝合针”——DNA连接酶

(1)两种ＤＮA连接酶（Ｅ·coliDNA连接酶和T4—DNA连接酶）的比较：

①相同点:都缝合磷酸二酯键。

②区别:E·coｌiＤＮA连接酶起源于T４噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而Ｔ４ＤNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低.

(2)与DNA聚合酶作用的异同：??????????ＤＮA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DＮＡ连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。

3.“分子运送车”－－载体

(1)载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。

②具备一至多个限制酶切点,供外源ＤNA片段插入。

③具备标记基因,供重组ＤNA的鉴定和选择.

(２)最常用的载体是?质粒,它是一个裸露的、结构简朴的、独立于细菌染色体之外,并具备自我复制能力的双链环状ＤNＡ分子。

(3)其它载体:噬菌体、动植物病毒

（二）基因工程的基本操作程序

第一步：目标基因的获取

1.目标基因是指:是人们所需要转移或改造的基因

2。获取目标基因的方法_______＿_________＿__________＿_＿_＿_________

3.原核基因采取直接分离取得，真核基因是人工合成.人工合成目标基因的常用方法有反转录法_和化学合成法＿。

4。PCR技术扩增目标基因

(１)原理:DＮA双链复制

（2)过程:第一步:加热至90～９5℃DNＡ解链;第二步:冷却到55~６０℃，引物结合到互补DNA链；第三步:加热至70~７5℃，热稳定ＤNA聚合酶从引物起始互补链的合成。

第二步:重组DNA分子

1。目标:使目标基因在受体细胞中稳定存在，而且可以遗传至下一代,使目标基因可以体现和发挥作用。

2．构成:目标基因+开启子＋终结子＋标记基因+复制原点

(1）开启子:是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出ｍＲNA,最终取得所需的蛋白质。

(2)终结子:也是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的尾端.

(3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目标基因,从而将含有目标基因的细胞筛选出来.常用的标记基因是抗生素基因。

第三步：转化受体细胞

1.转化的概念:是目标基因进入受体细胞内，而且在受体细胞内维持稳定和体现的过程。

２.常用的转化方法:

将目标基因导入植物细胞:采取最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等.

将目标基因导入动物细胞:最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵．

将目标基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的因素是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少,最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是:先用Ｃa2+解决细胞，使其成为感受态细胞，再将重组体现载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程。

３.重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因体现载体受体细胞的依据是标记基因是否体现。

第四步:目标基因的检测和体现

1.一方面要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目标基因，方法是采取DNA分子杂交技术。

２。其次还要检测目标基因是否转录出了mRNA，方法是采取用标记的目标基因作探针与mRNA杂交.

3．最终检测目标基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原－抗体杂交。

4。有时还需进行个体生物学水平的鉴定.如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。

（三)基因工程的应用

1。植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，运用转基因改良植物的品质。

2。动物基因工程:提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物.

3。基因治疗:把正常的外源基因导入病人体内,使该基因体现产物发挥作用.

(四）蛋白质工程的概念

蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功效的关系作为