高效液相色谱优秀 (2).pptVIP

荧光检测器检测原理：当某些溶液受紫外光照射后，能吸收紫外光线而处于不稳定的激发状态，紧接着辐射出比紫外光波更长的光线，即荧光。在被测溶质浓度较低时，溶质受激发而发生的荧光强度与被测溶质的浓度成正比关系。第30页，共62页，星期日，2025年，2月5日仪器结构高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；返回第31页，共62页，星期日，2025年，2月5日电化学检测器电化学检测器是根据电化学分析方法而设计的检测器。主要有两种类型：一种是根据溶液的导电性质，通过测定流经检测器的离子溶液电导率的大小来测量离子浓度，此类检测器是高效离子色谱采用的主要检测器；另一类是根据化合物在电解池中工作电极上发生的氧化-还原反应，通过测量电位、电流和电量来确定化合物在溶液中的浓度。返回第32页，共62页，星期日，2025年，2月5日§5-3高效液相色谱基本原理表征液相色谱柱填充性能的重要参数总孔率、柱压力降和柱渗透率高效液相色谱塔板理论高效液相色谱的速率理论返回第33页，共62页，星期日，2025年，2月5日总孔率式中：F—流动相的体积流速，cm3／s；u—流动相的平均线速，cm/s;r一柱内径的半径，cm;tM—柱的死时间；L—柱长，cm；V—色谱柱的空体积，cm3。εT表达了色谱柱填料的多孔性能，当使用全多孔硅胶固定相时，εT约为0.85，使用非多孔的玻璃微珠(或硅胶)固定相时，εT约为0.40，可认为是柱中颗粒之间的孔率，用ε表示。返回第34页，共62页，星期日，2025年，2月5日柱压力降式中η一流动相的粘度，MPa·s;k0—色谱柱的比渗透系数；dp—固定相颗较直径，μm；φ—色谱柱的阻抗因子；P1、P0—色谱柱的入口压力和出口压力，MPa。返回第35页，共62页，星期日，2025年，2月5日柱渗透率柱渗透率KF：表示流动相通过柱子的难易程度。在高效液相色谱法中，由于使用液体流动相，其粘度大于气体流动相，且固定相粒度又小，为保证柱子在较低压力下正常操作，总希望柱渗透率要大。返回第36页，共62页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱的速率理论其中：Cd为填充系数，为一常数；Cm是容量因子k的函数，为一常数，其值取决于柱直径、形状和填充状况，当柱填充均匀紧密时，其值下降；Csm是与固定相颗粒微孔中被流动相所占据部分的分数以及容量因子k有关，为一常数；Cs是与容量因子k有关的常数；Dm为组分在流动相中的扩散系数，比气相扩散系数小4~5个数量级；Ds为组分分子在固定液内的扩散系数；返回第37页，共62页，星期日，2025年，2月5日§5-4高效液相色谱流动相一、液相色谱的流动相流动相特性流动相类别流动相选择选择流动相时应注意的几个问题返回第38页，共62页，星期日，2025年，2月5日（1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况。（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液-液色谱法，极性柱也称正相柱。（3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液-液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。流动相的特性返回第39页，共62页，星期日，2025年，2月5日流动相类别按流动相组成分：单组分和多组分；按极性分：极性、弱极性、非极性；按使用方式分：等度淋洗和梯度淋洗。常用溶剂：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。第40页，共62页，星期日，2025年，2月5日流动相选择在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。常用溶剂的极性顺序：水(最大)甲酰胺乙腈甲醇乙醇丙醇丙酮二氧六环四氢呋喃甲乙酮正丁醇乙酸乙酯乙醚异丙醚二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小)返回第41页，共62页，星