玉米赤霉烯酮内酯酶的突变体设计、高效表达及应用.pdfVIP

摘要

ZEN

玉米赤霉烯酮（）是一种大环非极性化合物，其亲水性低于黄曲霉毒素，具

有在不同溶剂中溶解的特性。在生物体内，ZEN转化为α-ZOL和β-ZOL，然而α-ZOL

在动物中具有更强的毒性。ZEN对实验室动物和畜牧业动物产生多方面危害，包括

影响卵泡结构、睾丸细胞损害、干扰母猪妊娠、抑制母猪生殖系统等。玉米赤霉烯酮

ZHDZEN

内酯酶（）是一种高效降解的酶，通过催化过程将其转化为毒性更低的产

物。ZHD的结构与催化机制受特定残基的调控，突变可显著影响其酶活性。结合温

度因子以及Rosetta对接筛选是本文采取的手段，温度因子与原子均方位移（U）成

U

正比，增加导致温度因子升高，降低原子散射贡献，意味着该原子在模拟过程中较

为不稳定。

本研究基于活性口袋预测挖掘了潜在高活性结构，选择5C8Z进行突变设计。通

过分子动力学模拟得到各个残基的温度因子，并挑选出133-140以及215-221位点，

通过Rosetta的对接模块用于后续的饱和突变筛选，确定了在前10个DrugScore值中

4个结合自由能最高的突变体。突变后氢键数目最多的构象的药物评分高于野生型。

-1

在后续的实验室研究中，Mut1的周转数最高，为11915.754s，而Mut6则最低。

在k/K方面，野生型与Mut1相近。构建Mut1的多拷贝后得到的三拷贝的酶活为

catM

90552.707U/mL。通过50L发酵，相较于摇瓶发酵，其酶活提升了5倍，在96h下

4

484903.691U/mL1g200×10U

罐时达到，经过冻干后的粉剂样品酶活达到。

在猪肠道模拟中，高浓度的酶粉剂在偏酸性环境中表现降解率下降，但仍有治疗

效果。在中性或碱性水相中，粉剂能有效降解天然存在的玉米赤霉烯酮。通过加入

2500U190%DHZEN

粉剂，可在分钟内降解霉变玉米中的玉米赤霉烯酮。降解产物为，

中间产物为HZEN。

综合而言，本研究结合模拟和实验方法，通过计算机辅助设计突变体和多拷贝技

术提高酶表达，成功应用于猪肠道模拟和霉变玉米的玉米赤霉烯酮降解，为相关领域

的研究提供了有力支持。

关键词：玉米赤霉烯酮内酯酶；猪肠道模拟；Rosetta；温度因子

I

ABSTRACT

Zearalenone(ZEN)isalargecyclicnon-polarcompoundwithlowerhydrophilicity

thanaflatoxin，exhibitingsolubilityinvarioussolvents.Inbiologicalorganisms，ZEN

undergoesconversiontoα-ZOLandβ-ZOLwiththepresenceofα-ZOLpotentially

，

leadingtofurthertoxicityinanimals.ZENposesmultifacetedhazardstolaboratory

animalsandlivestockincludingeffectsonfolliclestructuretesticularcelldama