免疫学检验化学发光免疫技术61课件.pptxVIP

免疫学检验;1.化学发光剂的概念及常用的化学发光剂。

2.化学发光免疫分析的基本原理及其技术类

型。

3.化学发光酶免疫分析基本原理及其分离技

术。

4.电化学发光免疫分析基本原理。

5.化学发光免疫技术的临床应用。;目录;化学发光免疫技术是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的抗原抗体反应技术相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、维生素和药物等的检测分析技术。该技术具有特异性高、灵敏度高、分离简便、快速、试剂无毒、安全稳定、可自动化分析等特点，在免疫学检验中应用广泛。;;1.光照发光;发生在生物体内的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP产能，生成激发态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子的形式释放出来。;一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以下条件：;在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物称为化学发光剂或发光底物。;作为化学发光免疫技术的化学发光剂应符合以下几个条件：;常用的化学发光剂或发光底物有

1.直接化学发光剂

2.酶促反应的发光底物

3.电化学发光剂;1.直接化学发光剂;吖啶酯在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长

为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发

态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。

;2.酶促反应的发光底物;鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化

学发光反应，辐射出最大发射波长为425nm的光。;鲁米诺增强发光反应原理;〔3-(2‘-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3“-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷〕〕;电化学发光剂是指通过在电极表面进行电化学反应而发光的物质。如化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+和电子供体三丙胺（TPA）在阳性电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。;用化学发光剂（如吖啶酯）直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗原(抗体)和磁颗粒性的抗体（抗原）发生免疫反应后，通过磁场把结合状态和游离状态的化学发光剂标记物分离开来，这时只需加入氧化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光。由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能，可从标准曲线上计算出待测抗原(抗体)的含量;化学发光免疫分析双抗体夹心法原理示意图;1.分离方法

常用磁颗粒分离技术，即用抗原或抗体包被

磁粒，与标本中相应抗体或抗原及吖啶酯标

记的抗体或抗原通过一定模式的免疫学反应

后,最终通过在磁场中冲洗将结合到免疫复合

物中的标记物和游离标记物进行分离的技术。;2.常用的免疫学反应模式;抗原抗体结合反应;化学发光酶免疫分析（CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗体(抗原)发生免疫反应后，经洗涤将结合物与游离的酶标物分离后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。;碱性磷酸酶化学发光酶免疫分析双抗体夹心法原理示意图;1.根据标记酶不同分类可分为辣根过氧化物酶标记的

化学发光酶免疫分析和碱性磷酸酶标记的化学发光酶免

疫分析。前者常以鲁米诺或其衍生物作为发光底物，后

者常以AMPPD作为发光底物。

2.根据免疫学反应模式分类同化学发光免疫分析，主要

有双抗体夹心法、双抗原夹心法和固相抗原竞争法等主

要模式，所不同只是相应抗原或抗体上标记的是酶而不

是直接标记发光剂。;抗原抗体结合反应;电化学发光免疫分析（ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原)，通过抗原抗体反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度对待测的抗原或抗体进行定量分析，它包括电化学和化学发光两个过程。;电化学发光免疫分析双抗体夹心法原理示意图;电化学发光免疫测定示意图;1.分离方法常用磁颗粒分离技术。

2.免疫学反应模式其反应模式同发光免疫分析，主

要有双抗体夹心法、双抗原夹心法和固相抗原竞争

法三种主要模式，所不同只是相应抗原或抗体上标

记的是三联吡啶钌。;抗原抗体反应;一、化学发光免疫技术的特点;1.甲状腺激素T3、T4、hTSH、FT4、FT3、抗

TPO、甲状腺球蛋白、抗甲状腺球蛋白抗体等。

2.生殖激素β-HCG、催乳素、促卵泡激素、促黄

体激素、孕酮、雌二醇、非结合雌三醇、甲胎蛋白、

睾丸酮、硫酸脱氢异雄酮。

3.肾上腺/垂体激素皮质醇、尿皮质醇、人生长激

素、甲状旁腺素、促肾上腺皮质激素。;4.贫血因子维生素B12、叶酸、红细胞叶酸、铁蛋

白等。

5.肿瘤标记