免疫学检验荧光免疫技术67课件.pptxVIP

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免疫学检验;;目录;荧光免疫技术是将抗原抗体反应的特异性与荧光检测技术的敏感性和直观性相结合而建立的一种标记免疫技术。;荧光免疫技术:

用荧光素标记Ab或Ag,与待测标Ag或Ab结合,通过检测荧光,确定标本中有无相应的Ab或Ag。

;一、荧光的基本知识;Stokes位移:荧光物质从激发态回到基态的过程中,由于部分能量丢失而导致发射光波长比激发光波长,两者波长之差。;荧光效率

荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率。

;荧光寿命

荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程度所用的时间。各种荧光物质的荧光寿命不同。

荧光淬灭

荧光物质在某些理化因素作用下,发射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。如紫外线照射、高温(≥20℃)、苯胺、酚、硝基苯、I-等。

*荧光免疫检测中避免荧光淬灭的发生;

消除非特异性荧光(本底)的干扰。

;荧光偏振

荧光物质经单一平面的偏振光照射后,吸收光能并发出单一平面的偏振荧光的现象。;荧光物质;三、荧光抗体的制备;三、荧光抗体的制备;定性和定位检测,或对自身

抗体进行定性和滴度测定;;二、方法类型;;;;三、关键技术;标本制作;荧光抗体染色

于已固定的标本上滴加经相关试剂(含适当稀释的荧光抗体),置湿盒内25℃~37℃温育30分钟左右或4℃过夜;然后用PBS充分洗涤,待干燥后镜检。

;;隔热滤光片:阻断红外线通过而隔热。

激发滤光片:位于光源和物镜之间,使紫外线

(激发光)透过。

吸收滤光片:位于物镜和目镜之间,阻断激发光而使发射的荧光透过,保护眼睛。;;设立实验对照:阳性对照和阴性对照

区分特异和非特异染色

阳性细胞显色分布:胞质型、胞核型和膜表面型;四、方法评价与应用;第四节应用;寄生虫(猴胚肾细胞内弓形虫);;其他:如免疫病理、肿瘤等检测;(timeresolvedfluoro-immunoassay,TRFIA)

;第三节时间分辨荧光免疫测定;;时间分辨;Eu3+元素的stokes位移;;;;;三、方法评价;四、临床应用;(fluorescencepolarizationimmunoassay,FPIA)

;一、基本原理;(一)FPIA原理;二、方法评价;三、临床应用;第五节免疫芯??技术;一、基本原理;(一)FPIA原理;;三、关键技术;四、方法评价;五、临床应用;;感谢观看

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