环境仪器分析第七章高效液相色谱法.pptVIP

续前2）涡流扩散项及其影响next2.讨论：1）流动相流速对HPLC板高的影响（与GC对比）第30页，共55页，星期日，2025年，2月5日图示第31页，共55页，星期日，2025年，2月5日续前3）传质阻抗项及其影响第32页，共55页，星期日，2025年，2月5日图示第33页，共55页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱仪由以下五部分组成：高压输液系统进样系统分离系统检测系统记录系统（记录仪、积分仪和色谱工作站）第四节高效液相色谱仪第34页，共55页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱仪流程图1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质）2．高压泵（输液泵）3．进样装置4．色谱柱——分离5．检测器——分析6．废液出口或组分收集器7．记录装置第35页，共55页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱仪的工作过程：输液泵将流动相一稳定的流速或压力输送到分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品倒入，流动相将样品带入色谱柱，在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据处理系统记录、处理或保存。第36页，共55页，星期日，2025年，2月5日1．高压输液系统：溶剂储存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表等。泵：按输出液恒定的因素分恒压泵：流量精度不稳恒流泵：常用对泵的要求：无脉动流速恒定流量可调耐腐蚀便于实现程序控制死体积小，便于测压、调整及维护。第37页，共55页，星期日，2025年，2月5日2．进样装置包括进样口、注射器和进样阀等，作用是把分析试样有效的送入色谱柱上进行分离。1）隔膜进样---微量注射器（高分子有机硅胶垫→进样室）GC系统压力较小，可以HPLC系统压力太大，必须停泵进样（早期）隔膜容易吸附样品产生记忆效应2）阀进样：不必停泵，六通阀第38页，共55页，星期日，2025年，2月5日3．色谱柱：柱内径2~5mm,柱长10~30cm装柱方法：干法和湿法两种填料粒度大于20μm的可用干法装柱；粒度小于20μm的填料不宜用干法装柱，这是由于微小颗粒表面存在着局部电荷，具有很高的表面能，因此在干燥时倾向于颗粒间的相互聚集，产生宽的颗粒范围并粘附于管壁，这些都不利于获得高的柱效。目前，对微颗粒填料的装柱只能采用湿法完成。湿法也称匀浆法，即以一合适的溶剂或混合溶剂作为分散介质，使填料微粒在介质中高度分散，形成匀浆，然后，用加压介质在高压下将勾桨压入柱管中，以制成具有均匀、紧密填充床的高效柱。柱再生：维护、保养、柱子的冲洗第39页，共55页，星期日，2025年，2月5日第1页，共55页，星期日，2025年，2月5日第一节概述高效液相色谱法：以气相色谱为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法一、HPLC与经典LC区别二、HPLC与GC差别三、高效液相色谱的特点四、高效液相色谱的局限性第2页，共55页，星期日，2025年，2月5日一、HPLC与经典LC区别主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段1．经典LC：仅做为一种分离手段柱内径1~3cm，固定相粒径100μm且不均匀常压输送流动相柱效低（H↑，n↓）分析周期长无法在线检测2．HPLC：分离和分析柱内径2~6mm，固定相粒径10μm（球形，匀浆装柱）高压输送流动相柱效高（H↓，n↑）分析时间大大缩短可以在线检测第3页，共55页，星期日，2025年，2月5日第4页，共55页，星期日，2025年，2月5日二、HPLC与GC差别相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测主要差别：分析对象的差别和流动相的差别1．分析对象GC：在操作温度下能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测占有机物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制分子量大、